ھۈجەيرە بىۋاسىتە RT qPCR يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرى - تاقمان بىۋاسىتە ھۈجەيرە لىز ھۈجەيرىسى تەييار بىر باسقۇچلۇق qRT-PCR يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرى
چۈشەندۈرۈش
بۇ مەھسۇلات ئۆزگىچە لىز بۇففېر سىستېمىسى ئارقىلىق RT-qPCR ئىنكاسى ئۈچۈن مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرە ئەۋرىشكىسىدىن RNA نى تېزلىكتە قويۇپ بېرىدۇ ، ۋاقىت ئىسراپچىلىقى ۋە جاپالىق RNA تازىلاش جەريانىنى يوقىتىدۇ ، ھەمدە تەلەپ قىلىنغان RNA قېلىپىنى قولغا كەلتۈرۈشكە پەقەت 7 مىنۇتلا ۋاقىت كېتىدۇ ، بۇ زاپچاس تەمىنلىگەن 5 × بىۋاسىتە RT ئارىلاشمىسى ، 2 × بىۋاسىتە qPCR ئارىلاشما تاقمان ھەقىقىي ۋە ئۈنۈملۈك ھالدا PCR نەتىجىسىنى قولغا كەلتۈرەلەيدۇ.
5 × بىۋاسىتە RT ئارىلاشمىسى ۋە 2 × بىۋاسىتە qPCR Mix-Taqman نىڭ كۈچلۈك چەكلىگۈچكە بەرداشلىق بېرىش ئىقتىدارى بار بولۇپ ، قېلىپ سۈپىتىدە ئۆلچەنگەن ئەۋرىشكىنىڭ لىزاتىدىن پايدىلىنىپ ئۈنۈملۈك بۇرۇلۇش ۋە كونكرېت كۈچەيتكىلى بولىدۇ.رېئاكتور تەركىبىدە Foregene Reverse Transcriptase ، Hot D-Taq DNA Polymerase ، dNTPs ، MgCl قاتارلىقلار بار.2، رېئاكسىيە بۇففېر ، PCR ئەلالاشتۇرغۇچ ۋە تۇراقلاشتۇرغۇچ ، لىز بۇففېر ئارقىلىق ئەۋرىشكىنى تېز ۋە ئاسان بايقىغىلى بولىدۇ ، ھەمدە يۇقىرى سەزگۈرلۈك ، خاسلىق ۋە مۇقىملىق ئالاھىدىلىكىگە ئىگە.
ئۆلچىمى
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
يۈرۈشلۈك زاپچاسلار
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| يۈرۈشلۈك زاپچاسلار 20μl qPCR ئىنكاس سىستېمىسى | DRT-01021 | DRT-01022 | دىققەت | |
| 200 T. | 1000 T. | |||
|
Part I | Buffer CL | 4 ml | 20 مىللىلېتىر | Cell Lysis |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Part II | DNA Eraser | 80 μl | 400 μl | |
| 5 × Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2 × بىۋاسىتە qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX پايدىلىنىش بوياق | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-Free ddH2O | 1.7 مىللىمېتىر | 10 مىللىلېتىر | ||
| كۆرسەتمە قوللانمىسى | 1 پارچە | 1 پارچە | ||
*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman نى ئايرىم سېتىۋالغىلى بولىدۇ
ئالاھىدىلىكى ۋە ئەۋزەللىكى
■ئاددىي ۋە ئۈنۈملۈك: Cell Direct RT تېخنىكىسى بىلەن RNA ئەۋرىشكىسىنى 7 مىنۇتتىلا ئېرىشكىلى بولىدۇ.
Ample ئەۋرىشكە تەلىپى كىچىك ، 10 ھۈجەيرە تەكشۈرگىلى بولىدۇ.
■ يۇقىرى ئېقىمى: 384 ، 96 ، 24 ، 12 ، 6 قۇدۇق تاختىسىدا يېتىشتۈرۈلگەن ھۈجەيرىلەردە RNA نى تېزلا بايقىيالايدۇ.
■ DNA ئۆچۈرگۈچى قويۇپ بېرىلگەن گېننى تېزلىكتە چىقىرىپ تاشلاپ ، كېيىنكى تەجرىبە نەتىجىسىگە بولغان تەسىرىنى زور دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ.
■ ئەلالاشتۇرۇلغان RT ۋە qPCR سىستېمىسى ئىككى باسقۇچلۇق RT-PCR تەتۈر ترانسكرىپسىيەسىنى تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ۋە PCR نى تېخىمۇ كونكرېتلاشتۇرىدۇ ، ھەمدە RT-qPCR ئىنكاس چەكلىگۈچكە تېخىمۇ چىداملىق.
Kit application
قوللىنىش دائىرىسى: مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرىلەر.
- ئەۋرىشكە لايزىسى ئارقىلىق تارقىتىلغان RNA: پەقەت بۇ يۈرۈشلۈكنىڭ RT-qPCR قېلىپىغىلا ماس كېلىدۇ.
- بۇ زاپچاسنى تۆۋەندىكى مەقسەتلەردە ئىشلىتىشكە بولىدۇ: گېن ئىپادىلەش ئانالىزى ، siRNA ۋاسىتىلىك گېننىڭ سۈكۈت قىلىش ئۈنۈمىنى دەلىللەش ، دورا تەكشۈرۈش قاتارلىقلار.
ساقلاش ۋە ساقلاش ئۆمرى
بۇ زاپچاسنىڭ I قىسمى 4 دە ساقلىنىشى كېرەك℃;ئىككىنچى قىسىم -20 at دە ساقلىنىشى كېرەك.
Foregene Protease Plus II نى 4 دە ساقلاش كېرەك℃ ، -20 at دە توڭلىماڭ.
Reagent 2×بىۋاسىتە qPCR Mix-Taqman -20 دە ساقلىنىشى كېرەك℃قاراڭغۇلۇقتائەگەر دائىم ئىشلىتىلسە ، 4 دە ساقلىغىلى بولىدۇShort قىسقا مۇددەتلىك ساقلاش ئۈچۈن (10 كۈن ئىچىدە ئىشلىتىش).
ھەقىقىي ۋاقىت PCR دەسلەپكى لايىھىلەش پرىنسىپى
ئالغا ئىلگىرىلەش ۋە تەتۈر يۆنىلىشلىك كۆرسەتكۈچ
Real Time PCR ئۈچۈن دەسلەپكى لايىھىلەش ئىنتايىن مۇھىم.باشلانغۇچلار PCR كېڭەيتىشنىڭ كونكرېتلىقى ۋە ئۈنۈمى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، تۆۋەندىكى پرىنسىپلارغا ئاساسەن لايىھىلىگىلى بولىدۇ:
- دەسلەپكى ئۇزۇنلۇقى: 18-30bp.
- GC مەزمۇنى:% 40-60.
- Tm قىممىتى: Primer 5 غا ئوخشاش دەسلەپكى لايىھىلەش يۇمشاق دېتالى دەسلەپكى كۆرسەتكۈچنىڭ Tm قىممىتىنى بېرەلەيدۇ.يۇقىرى ئېقىن ۋە تۆۋەن ئېقىندىكى Tm قىممىتى ئىمكانقەدەر يېقىن بولۇشى كېرەك.Tm ھېسابلاش فورمۇلاسىنى ئىشلىتىشكە بولىدۇ: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR ئىجرا قىلغاندا ، تېمپېراتۇرا ° C5 تىن تۆۋەن تېمپېراتۇرا ئادەتتە تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى قىلىپ تاللىنىدۇ (تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسىنىڭ ماس ھالدا ئۆسۈشى PCR ئىنكاسىنىڭ خاسلىقىنى ئاشۇرالايدۇ).
- Primers and PCR products:
- لايىھىلەش دەسلەپكى PCR كېڭەيتىش مەھسۇلاتنىڭ ئۇزۇنلۇقى ئەڭ ياخشىسى 100-150bp.
- قېلىپنىڭ ئىككىلەمچى قۇرۇلما رايونىدىكى لايىھىلەش باشلانغۇچلىرىنى ئىمكانقەدەر ساقلىنىش كېرەك.
- يۇقىرى ئېقىن ۋە تۆۋەنكى ئېقىندىكى 3 ′ ئۇچى ئارىسىدا 2 ياكى ئۇنىڭدىن ئارتۇق تولۇقلاش ئاساسى شەكىللىنىشتىن ساقلىنىڭ.
- Primer 3 ′ تېرمىنال ئاساسى ئۇدا 3 G ياكى C بىلەن بىللە بولمايدۇ.
- پىرىمېرلارنىڭ ئۆزىدە قوشۇمچە قۇرۇلما بولالمايدۇ ، بولمىسا چاچ ياساش قۇرۇلمىسى شەكىللىنىپ ، PCR نىڭ كۈچىيىشىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.
- دەسلەپكى تەرتىپتە ATCG نى ئىمكانقەدەر تەكشى تەقسىملەش ، 3 ′ تېرمىنال بازىسىدىن T دىن ساقلىنىش كېرەك.
قوشۇمچە1 ： C.ell DirectRT-qPCR Kit component تولۇقلىما بولىقى
1. Cell Lysis Solution
| Cell Lysis Solution | |||
| يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (24 قۇدۇق لىز سىستېمىسى / قۇدۇق) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T. | 500 T. | ||
| Partمەن | Buffer CL | 20 مىللىلېتىر | 100 مىللىمېتىر |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 مىللىلېتىر | |
| PartII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (20 μl رېئاكسىيە سىستېمىسى) | DRT-01011-B1 |
| 200 T. | |
| 5 × Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (20 μl رېئاكسىيە سىستېمىسى) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T. | 1000 T. | |
| 2 × بىۋاسىتە qPCR ئارىلاش-تاقمان | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20 × ROX پايدىلىنىش بوياق | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 مىللىمېتىر | 10 مىللىلېتىر |
كۆرسەتمە قوللانمىسى:
