1. RNA ئېرىتمىسىنىڭ سۈمۈرۈلۈشىنى ئېنىقلاڭ
280 ، 320 ، 230 ۋە 260 nm دىكى سۈمۈرۈلۈش ئايرىم-ئايرىم ھالدا يادرو كىسلاتاسى ، تەگلىك (ئېرىتمە قالايمىقانلىقى) ، تۇز قويۇقلۇقى ۋە ئاقسىل قاتارلىق ئورگانىك ماددىلارنىڭ قىممىتىگە ۋەكىللىك قىلىدۇ.ئادەتتە پەقەت OD260 / OD280 (نىسبىتى ، R) گە قاراڭ.1.8 ~ 2.0 بولغاندا ، بىز RNA دىكى ئاقسىل ياكى باشقا ئورگانىك ماددىلارنىڭ بۇلغىنىشىغا بەرداشلىق بېرەلەيمىز دەپ ئويلايمىز ، ئەمما دىققەت قىلىشقا تېگىشلىكى شۇكى ، Tris بۇففېر سۈپىتىدە سۈمۈرۈلۈشنى بايقىغاندا ، R قىممىتى 2 دىن چوڭ بولۇشى مۇمكىن (ئادەتتە ئۇ <2.2 بولۇشى كېرەك).R <1.8 بولغاندا ، ھەل قىلىش چارىسىدىكى ئاقسىل ياكى باشقا ئورگانىك ماددىلارنىڭ بۇلغىنىشى تېخىمۇ كۆرۈنەرلىك بولىدۇ ، RNA نىڭ تەقدىرىنى ئېھتىياجغا ئاساسەن بەلگىلىگىلى بولىدۇ.R> 2.2 بولغاندا ، RNA نىڭ يەككە يادرو كىسلاتاسىغا ھىدرولىزلانغانلىقىدىن دېرەك بېرىدۇ.
2. RNA نىڭ ئېلېكترونلۇق فورماتى
ئادەتتە ، RNA ئېلېكتىرو فوروزىغا ئايرىش گېلى ئىشلىتىلىدۇ ، ئەمما ئۇ پەقەت RNA نىڭ سۈپىتىنى بايقاش ئۈچۈنلا بولسا ، گېلىنى ئايرىشنىڭ ھاجىتى يوق ، ئادەتتىكى ئاگاروزا گېلىنى ئىشلىتىشكە بولىدۇ.ئېلېكتروفورېزنىڭ مەقسىتى 28S ۋە 18S بەلۋاغنىڭ مۇكەممەللىكى ۋە ئۇلارنىڭ نىسبىتىنى ياكى mRNA پۈركۈشنىڭ مۇكەممەللىكىنى بايقاش.ئادەتتە ، ئەگەر 28S ۋە 18S بەلۋاغلىرى ئوچۇق ، سۈزۈك ۋە ئۆتكۈر بولسا (بەلۋاغنىڭ گىرۋىكىنى كۆرسىتىدۇ) ، ھەمدە 28S نىڭ يورۇقلۇقى 18S گۇرۇپپىسىنىڭ ئىككى ھەسسىسىدىن ئېشىپ كەتسە ، بىز RNA نىڭ سۈپىتىنى ياخشى دەپ قارايمىز.
يۇقىرىقىلار بىز ئادەتتە ئىشلىتىدىغان ئىككى خىل ئۇسۇل ، ئەمما بۇ ئىككى خىل ئۇسۇلنىڭ ھېچقايسىسى بىزگە RNA ھەل قىلىش چارىسىدە قالدۇق RNase بار-يوقلۇقىنى ئېنىق ئېيتىپ بېرەلمەيدۇ.ئەگەر ھەل قىلىش چارىسىدە RNase ناھايىتى ئاز بولسا ، ئۇنى يۇقارقى ئۇسۇل بىلەن بايقىشىمىز تەس ، ئەمما كېيىنكى فېرمېنتلىق ئىنكاسلارنىڭ كۆپىنچىسى 37 گرادۇستىن يۇقىرى ۋە ئۇزۇن ۋاقىت ئېلىپ بېرىلىدۇ.بۇنداق بولغاندا ، ئەگەر RNA ھەل قىلىش چارىسىدە RNase ئىنتايىن ئاز بولسا ، ئۇنداقتا كېيىنكى تەجرىبىلەردە ئۇلارنىڭ رولىنى جارى قىلدۇرىدىغان ئىنتايىن مۇۋاپىق مۇھىت ۋە ۋاقىت بولىدۇ ، ئەلۋەتتە بۇ ۋاقىتتا تەجرىبە سوغۇق بولىدۇ.تۆۋەندە بىز RNA ھەل قىلىش چارىسىدە قالدۇق RNase بار-يوقلۇقىنى جەزملەشتۈرەلەيدىغان بىر ئۇسۇلنى تونۇشتۇرىمىز.
3. ئىسسىقلىقنى ساقلاش سىنىقى
ئەۋرىشكە قويۇقلۇقىغا ئاساسەن ، RNA ئېرىتمىسىدىن ئىككى 1000 ng RNA نى چىقىرىپ ، 0.5 مىللىمېتىر مەركەزدىن قاچۇرۇش تۇرۇبىسىغا سېلىڭ ، ھەمدە pH 7.0 Tris بۇففېر بىلەن تولۇقلاپ ، ئومۇمىي ھەجىمى 10 ul ، ئاندىن تۇرۇبىنىڭ دوپپىسىنى پېچەتلەڭ.ئۇلارنىڭ بىرىنى 70 سېلسىيە گرادۇسلۇق تۇراقلىق تېمپېراتۇرا سۇ مۇنچىسىغا سېلىپ ، 1 سائەت ئىسسىق ساقلاش كېرەك.يەنە بىر قىسمى -20 ° C توڭلاتقۇدا 1 سائەت ساقلانغان.ۋاقتى توشقاندا ، ئېلېكتروفورېزنىڭ ئىككى ئەۋرىشكىسىنى ئېلىڭ.ئېلېكتروفورېز تاماملانغاندىن كېيىن ، ئىككىسىنىڭ ئېلېكتروفورتىك بەلۋاغنى سېلىشتۇرۇڭ.ئەگەر بۇ ئىككىسىنىڭ بەلبېغى بىردەك بولسا ياكى كۆرۈنەرلىك پەرقى بولمىسا (ئەلۋەتتە ، ئۇلارنىڭ بەلۋاغلىرىمۇ 2-خىل ئۇسۇلدىكى شەرتكە توشىدۇ) ، بۇ RNA ئېرىتمىسىدە قالدۇق RNase بۇلغىنىشىنىڭ يوقلىقىدىن دېرەك بېرىدۇ ، RNA نىڭ سۈپىتى ئىنتايىن ياخشى.ئەكسىچە ، ئەگەر 70 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئەۋرىشكە ئېلىنغان ئەۋرىشكە روشەن ناچارلىشىشنى كۆرسەتسە ، بۇ RNA ئېرىتمىسىدە RNase بۇلغىنىشىنىڭ بارلىقىنى كۆرسىتىدۇ.
2 RNA ئېلىشنىڭ تەجرىبە ئۇسۇلى ۋە تېخنىكىسى
RNA نى چىقىرىشتا بىز دائىم ئۇچرايدىغان مەسىلىلەر: (1) RNA نىڭ مەھسۇلات مىقدارى تۆۋەن ؛(2) RNA نىڭ ئېغىر دەرىجىدە بۇلغىنىشى ؛(3) RNA ئېغىر ئورگانىك ئېرىتكۈچى بۇلغىنىش ؛(4) ئەۋرىشكە تۆۋەنلەش ۋە باشقا مەسىلىلەر
1. كۆپ ئىشلىتىلىدىغان RNA ئېلىش رېئاكتورى
گانىدىن ئىزوتىئوكيانات ئۇسۇلى ۋە ترىزول ئۇسۇلى ھايۋانلارنىڭ توقۇلمىلىرى ۋە ھايۋانات ھۈجەيرىسىدىن ئومۇمىي RNA ئېلىشتا ئەڭ كۆپ قوللىنىلىدىغان ئۇسۇل.ئۇ كىچىك ئەۋرىشكە ۋە توقۇلمىلارغا ئالاھىدە ماس كېلىدۇ ، مەسىلەن توشقان تېرىسى ۋە ھايۋانلارنىڭ ئۇلاش توقۇلمىلىرىدىن ئومۇمىي RNA ئېلىش قاتارلىقلار.ئۇنىڭدىن باشقا ، ترىزول ئومۇمىي مەقسەتلىك لىز رېئاكتورى بولۇش سۈپىتى بىلەن ئۆسۈملۈك توقۇلمىلىرى ، باكتېرىيە ، زەمبۇرۇغ ۋە باشقا توقۇلمىلارنى ئېلىشقىمۇ ئىشلىتىلىدۇ.تەركىبىدە پولىساخارىد ۋە پولىفېنول بار ئۆسۈملۈك توقۇلمىلىرىغا ، مەسىلەن تۆگە ئولىفېرا ، چاي يوپۇرمىقى ، قىچا قاتارلىقلار ، CTAB ئۇسۇلى ئارقىلىق ئومۇمىي RNA ئېلىشقىمۇ بولىدۇ.
مۇنتىزىم ئۇسۇل بولۇش سۈپىتى بىلەن ، قوش ئىستون ئۇسۇلىمۇ نورمال تېمپېراتۇرا مەشغۇلاتى سەۋەبىدىن ئىنتايىن ئالقىشقا ئېرىشكەن ، RNase نى قوشۇشنىڭ ھاجىتى يوق ، بىخەتەرلىك - خلوروفورم ، فېنول ۋە باشقا ئورگانىك رېئاكتورلارمۇ يوق.(تەۋسىيە قىلىنغان مەھسۇلاتلار )
2. ھايۋانات توقۇلمىلىرىدىن ئومۇمىي RNA ئېلىش
(1) يېڭى توقۇلمىلارنى تاللاشقا تىرىشىڭ ، ئەگەر ئۇ يېڭى بولمىسا (ئەڭ ياخشىسى ئۈچ ئاي ئىچىدە - 80 ℃ توڭلاتقۇ ياكى سۇيۇق ئازوتتا توڭلىتىلىدۇ. توقۇلمىلارنى ئۈزگەندە ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا بىۋاسىتە كېسىۋەتمەڭ ، ئۇنى مۇز ساندۇقىغا سېلىڭ ، قايتا-قايتا مۇزلاش ۋە ئېرىتىشتىن ساقلىنىڭ.
.چىقىرىۋېتىلگەن توقۇلمىلارنى تولۇق پارچىلاش ، پارچىلانغان توقۇلمىلارنى RNase ئىشلەتمەي EP تۇرۇبىسىغا سېلىش ، لىماتنى قوشۇش ، پارچىلانغان توقۇلمىلار لىمات بىلەن تولۇق ئۇچرىشىپ ، بىرىكتۈرۈشكە تەييارلىق قىلىش كېرەك.
(3) نورمال توقۇلمىلارغا ئوخشاش مۇڭ پۇرچاق چوڭلۇقىدىكى توقۇلمىلارنى (30-60 mg) تاللاڭ.ئەگەر توقۇلمىلاردا كۆپ مىقداردا ئاقسىل ، ماي ياكى جىگەر قاتارلىق قويۇق تالا توقۇلمىلىرى بولسا ، كېسىلگەن توقۇلمىلارنىڭ مىقدارىنى مۇۋاپىق ئاشۇرۇش ياكى ئازايتىش (ئىختىيارىي) 10 ~ 20 مىللىگىرامنى تاللاڭ).
.
.
(6) ئەڭ ئاخىرقى ئېلىشتىن كېيىن ئېرىشكەن RNA چوقۇم مۇز ساندۇقىغا قويۇپ ، RNA نىڭ چېكىنىشىنى ئازايتىش كېرەك.
3. ھايۋانات ھۈجەيرىسى RNA ئېلىش
(1) ئاسما ھۈجەيرە: مەركەزدىن قاچۇرۇش ۋە ئوتتۇراھالنى تاشلاش ، ستېرېئولۇق PBS بىلەن 1-2 قېتىم يۇيۇش ، ئاندىن مۇۋاپىق مىقداردا PBS بىلەن توختىتىش ، ئاندىن لىزغا لىزات قوشۇش.سۇيۇقلۇقنى پۈتۈنلەي تاشلىۋەتكەندىن كېيىن لىزاتنى بىۋاسىتە چۆكۈپ كەتكەن ھۈجەيرىلەرگە قوشماڭ.بۇ سىرتقى قەۋەتتىكى لايلانغان ھۈجەيرىلەردىن كېيىن قويۇپ بېرىلگەن گىستون بوغچىسىنىڭ چۆكمە ھۈجەيرىلەرنىڭ سىرتىغا چاپلىشىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ، بۇ ئارقىلىق پېلەك ئىچىدىكى ھۈجەيرىلەرنىڭ لىزات بىلەن بولغان ئالاقىسىنى چەكلەيدۇ.نەتىجىدە ھۈجەيرە لىمزىسىنىڭ تولۇق بولماسلىقى ۋە RNA مەھسۇلات مىقدارى تۆۋەنلەيدۇ.
.ئېلىش ئۈچۈن ئېنزىمنىڭ EP تۇرۇبىسىغا لىمات قوشۇڭ.
.
4. ئۆسۈملۈك RNA ئېلىش
ئۆسۈملۈك توقۇلمىلىرىدا فېنولىك بىرىكمىلەر مول ، ياكى پولىساخارىدلار مول ، ياكى بەزى نامەلۇم ئىككىلەمچى مېتابولىتلار بار ، ياكى RNase نىڭ ئاكتىپچانلىقى يۇقىرى.بۇ ماددىلار ھۈجەيرە لىمزىسىدىن كېيىن RNA بىلەن زىچ بىرلەشتۈرۈلۈپ ، ئېرىيدىغان مۇرەككەپ ماددىلار ياكى كوللوئىد چۆكمىلىرى ھاسىل بولىدۇ.شۇڭلاشقا ، ئۆسۈملۈك توقۇلمىلىرىنى چىقارغاندا ، ئۆسۈملۈكلەر ئۈچۈن زاپچاس تاللىشىمىز كېرەك.يۈرۈشلۈك زاپچاستىكى لىمات پولىفېنولنىڭ ئاسان ئوكسىدلىنىشى ۋە پولىساخارىد بىرىكمىسى ۋە يادرو كىسلاتاسىنىڭ ئايرىلىشى قاتارلىق مەسىلىلەرنى ئۈنۈملۈك ھەل قىلالايدۇ.
(پولىساخارىد پولىفېنول زاۋۇتى RNA ئېلىش ئۈچۈن ، تەۋسىيە قىلىنغان مەھسۇلاتلار:
(1) ئۆسۈملۈكنىڭ پوستى ، ئۇرۇقى ، ئۇرۇقى ، يوپۇرمىقى قاتارلىقلار مىناميوتتا تولۇق بولۇشى كېرەك.ئۇۋىلاش جەريانىدا سۇيۇق ئازوتنى ۋاقتىدا تولۇقلاپ ، ئەۋرىشكىنىڭ ئېرىپ كېتىشىدىن ساقلىنىش كېرەك.يەر ئەۋرىشكىسىنى تېزلىكتە لىزاتقا قوشۇپ سىلكىپ ، RNA نىڭ بۇزۇلۇشىدىن ساقلىنىش كېرەك.
(2) گۈرۈچ ، بۇغداي يوپۇرمىقى قاتارلىق تالا مول ئەۋرىشكىلەرگە ئېلىش مىقدارىنى مۇۋاپىق ئازايتىش كېرەك ، بولمىسا توقۇلمىلارنى ئۇۋىلاش ۋە لىمزى تولۇقلانمايدۇ ، نەتىجىدە ئېلىنغان RNA نىڭ مەھسۇلات مىقدارى تۆۋەن بولىدۇ.
(3) ئانار مېۋىسى ، تاۋۇز مېۋىسى ، شاپتۇل مېۋىسى قاتارلىق سۇ تەركىبى يۇقىرى ئۆسۈملۈك توقۇلمىلىرىغا ئەۋرىشكە كۆلىمىنى مۇۋاپىق ئاشۇرۇش كېرەك (100-200 مىللىگىرام ئىختىيارى).
.ئادەتتىكى توقۇلمىلارنىڭ بىرىكتۈرگۈچى ئۆسۈملۈك توقۇلمىلىرىنى بىرلەشتۈرۈشتە ئۈنۈملۈك بولماسلىقى مۇمكىن ، ئادەتتە تەۋسىيە قىلىنمايدۇ.
5. RNA ئېلىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش تەدبىرلىرى
(1) توقۇلما ئەۋرىشكىسى ئىمكانقەدەر يېڭى بولۇشى ، قايتا-قايتا مۇزلاش ۋە ئېرىتىشتىن ساقلىنىش كېرەك.
(2) ئېلىش جەريانىدا توقۇلمىلار تولۇق بولۇشى كېرەك ، توقۇلمىلارنىڭ مىقدارى بەك ئاز بولۇپ كەتمەسلىكى كېرەك.
(3) ئەۋرىشكە تولۇق لايزا قوشقاندىن كېيىن يېتەرلىك يوشۇرۇن ۋاقىت بېرىش كېرەك.
(4) ترىزول ئۇسۇلىنى ئېلىشتا ، قاتلامدىن كېيىن خاسىيەتلىك ماددىلارنى سۈمۈرۈش پرىنسىپى «كۆپ نەپەسلىنىشتىن ئاز نەپەس ئېلىشنى ياخشى كۆرىدۇ» ، ھەمدە ئوتتۇرا قەۋەتكە چىقارماسلىق كېرەك ، بولمىسا ئېغىر گېن گۇرۇپپىسىنىڭ بۇلغىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
(5) يۇيغاندا ، يۇيۇش سۇيۇقلۇقى تۇرۇبا تېمىنىڭ ئەتراپىغا تولۇق سىڭىپ ، پاكىز يۇيۇشقا كاپالەتلىك قىلىش كېرەك.
(6) تۈۋرۈك ئېلىش ئۇسۇلىغا قارىتا ، سۈمۈرگۈچ تۈۋرۈكنى يۇيۇپ بولغاندىن كېيىن ئايرىۋەتكەندىن باشقا ، يەنە دەرىجىدىن تاشقىرى پاكىز ئورۇندۇققا قويۇپ ، 5-10 مىنۇت ئۇرۇپ ، ئورگانىك ئېرىتكۈچىنى پۈتۈنلەي پارغا ئايلاندۇرۇش كېرەك.
(7) تۈۋرۈك ئۇسۇلىنىڭ ئاخىرقى قېتىم چىقىرىۋېتىلىشىدە ، DEPC سۈيىنى قوشقاندىن كېيىن ، ئۇنى 3-5 مىنۇت سىڭدۈرۈش كېرەك ، ياكى DEPC سۈيىنى ئالدىن 60 سېلسىيە گرادۇسقىچە قىزىتىپ ، يوقىتىش ئۈنۈمىنى ئاشۇرۇش كېرەك.ئەنئەنىۋى ترىزولنى ئايرىش ۋە ئىزوپروپانول يامغۇر يېغىش ئۇسۇلىدا ، ئاخىرقى RNA DEPC سۈيىدە ئېرىپ كېتىدۇ ، شۇڭا ئېرىتىشكە مۇۋاپىق ۋاقىت بېرىش كېرەك ، مەركەزدىن قاچۇرۇش تۇرۇبىسىنىڭ ئاستىنى تۇرۇبا ئۇچى بىلەن ئۇدا ئۇرۇپ بېرىش كېرەك.
3 T.hree RNA قويۇقلۇقىنىڭ تۆۋەن بولۇشىدىكى سەۋەب ۋە ھەل قىلىش چارىسى
1. ھوسۇلى بەك تۆۋەن
ئېلىنغان ئەۋرىشكە بەك تۆۋەن ، ئومۇمىي مىقدارى يېتەرلىك ئەمەس ، ياكى ئېلىنغان ئەۋرىشكە بەك كۆپ ، لىز تولۇق ئەمەس.ئېلىش ئۈچۈن مۇۋاپىق سۈپەتلىك توقۇلمىلار ياكى ھۈجەيرىلەرنى ئىشلىتىش ، ئەۋرىشكىنى ئالدىن داۋالاشنى ياخشى ئىشلەش ، لىمزى يېتەرلىك بولۇشى كېرەك.
2. گېن قالدۇقلىرى
Trizol ئۇسۇلى ئارقىلىق ئالغاندا ، خاسىيەتلىك ماددا قاتلانغاندىن كېيىن ئوتتۇرا قەۋەتكە سۈمۈرۈلسە ، گېننىڭ ئېغىر دەرىجىدە بۇلغىنىشى كېلىپ چىقىدۇ.ئوتتۇرا قەۋەتكە سۈمۈرۈلۈشتىن ساقلىنىش ئۈچۈن قاتلاممۇ-قاتلام ئالاھىدە دىققەت قىلىش كېرەك.ئەگەر ستون ئۇسۇلى ئېلىشقا ئىشلىتىلسە ، DNase I بولغان زاپچاسنى ئېلىش ئۈچۈن تاللىغىلى بولىدۇ.پەردىگە چاپلانغان يادرو كىسلاتاسى DNase I بىلەن بىۋاسىتە ھەزىم بولىدۇ ، بۇ DNA قالدۇقلىرىنى زور دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ.
3. RNA نىڭ ناچارلىشىشى
ئېلىنغان ئەۋرىشكىنىڭ ئۆزى بۇزۇلۇشى ياكى ئېلىش جەريانىدا پەيدا بولغان ناچارلىشىش بولۇشى مۇمكىن.ئىمكانقەدەر يېڭى ئەۋرىشكە RNA ئېلىش ئۈچۈن ئىشلىتىلىشى ، يىغىلغان ئەۋرىشكەلەرنى سۇيۇق ئازوت ياكى -80 سېلسىيە گرادۇسلۇق توڭلاتقۇدا ۋاقتىدا ساقلاش ، قايتا-قايتا مۇزلاش ۋە ئېرىتىشتىن ساقلىنىش كېرەك.RNA ئېلىش جەريانىدا RNase / DNase ھەقسىز كۆرسەتمىلەر ، مەركەزدىن ياسالغان تۇرۇبا ۋە باشقا ماتېرىياللارنى ئىشلىتىش كېرەك.ئېلىش جەريانى ئىمكانقەدەر تېز بولۇشى كېرەك.ئېلىنغان RNA نى مۇز ساندۇقىغا قويۇپ ، ۋاقتىدا -80 دە ساقلاش كېرەك.ئەگەر ئېلىنغان RNA نى گېلى ئېلېكتروفورىسى ئارقىلىق بايقاشقا توغرا كەلسە ، ئېلېكتروفورېزنى چىقىرىۋەتكەندىن كېيىن دەرھال ئېلىپ بېرىش ، ئېلېكتروفورېز بۇففېرنى يېڭىدىن تەييارلانغان ئورۇنغا ئالماشتۇرۇش كېرەك.
4. تۇز ۋە ئورگانىك ئېرىتكۈچى قالدۇقلار
ئېلىش رېئاكتورى تەركىبىدە فېنول ۋە گانىدىن تۇزى بار ، كىرئالغۇدا ئېتانول بار.ئېلىش جەريانىدا ، لىمات پۈتۈنلەي سۈمۈرۈلمىگەن ۋە تاشلىۋېتىلمىگەن ، كىرئالغۇ تولۇق قۇرۇتۇلمىغان.قالدۇق تۇز ۋە ئورگانىك ئېرىتكۈچى كېيىنكى تەتۈر كۆچۈرۈش ۋە PCR غا زىيانلىق.ئوخشىمىغان دەرىجىدىكى چەكلەش ، شۇڭا ئېلىش جەريانىدا توقۇلما لىماتنى تولۇق ئېلىۋېتىش ، يۇيۇش يېتەرلىك بولۇشى كېرەك ، شۇنداق بولغاندا تۇرۇبا ئەتراپىدىكى تاملارنى يۇيالايدۇ.ئۇنىڭدىن باشقا ، نەيچە بوشاپ ، ئۇرۇلۇش زۆرۈر قەدەم بولۇپ ، ئورگانىك ماددىلارنىڭ قالدۇقىنى تېخىمۇ تۆۋەنلىتىدۇ.
RNA ئېلىش ھەققىدىكى تېخىمۇ كۆپ ئۇچۇرغا ئېرىشمەكچى بولسىڭىز تور بېكىتىمىزگە ئەگىشىڭ:
تېخىمۇ كۆپ ئۇچۇرغا ئېرىشىش ئۈچۈن www.foreivd.com.
يوللانغان ۋاقتى: 01-دېكابىردىن 20-دېكابىرغىچە
