PCR ئەڭ كۆپ ئىشلىتىلىدىغان يادرو كىسلاتاسىنى كۈچەيتىش تېخنىكىسى بولۇپ ، سەزگۈرلىكى ۋە ئالاھىدىلىكى سەۋەبىدىن كەڭ قوللىنىلىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، PCR قايتا-قايتا ئىسسىقلىق تارقىتىشنى تەلەپ قىلىدۇ ، ئۇنىڭ كلىنىكىلىق مەيدان سىنىقىدا قوللىنىلىشىنى چەكلەيدىغان ئەسۋاب ۋە ئۈسكۈنىلەرگە تايىنىش چەكلىمىسىدىن قۇتۇلالمايدۇ.

90-يىللارنىڭ بېشىدىن باشلاپ ، نۇرغۇن تەجرىبىخانىلار توختىماي تېمپېراتۇرىنى كۈچەيتىش تېخنىكىسىنى تەرەققىي قىلدۇرۇشقا باشلىدى ، بۇ ئىسسىقلىق تارقىتىشنى تەلەپ قىلمايدۇ.ھازىر ئۇلار ئايلانما ۋاسىتىلىك ئىسسىقلىقنى كۈچەيتىش تېخنىكىسىنى ، تالنى ئالماشتۇرۇش ئىسسىقلىقنى كۈچەيتىش تېخنىكىسىنى ، دومىلاش چەمبىرىكىنى ئىسسىقلىق بىلەن كۈچەيتىش تېخنىكىسىنى ۋە يادرو كىسلاتا تەرتىپىگە تايىنىشنى تەرەققىي قىلدۇردى.ئىسسىقلىقنى كۈچەيتىش تېخنىكىسى ۋە باشقا تېخنىكىلار. 

Loop مۇرەسسە قىلىنغان ئىسسىقلىقنى كۈچەيتىش

كۈچەيتىش پرىنسىپى DNA نىڭ ° C 65 ئەتراپىدا ھەرىكەتچان تەڭپۇڭ ھالەتتە ئىكەنلىكىنى ئاساس قىلىدۇ.ھەر قانداق بىر قەغەز ئاساسى جۈپلىنىپ ، قوش لىنىيىلىك DNA نىڭ تولۇقلاش قىسمىغا كېڭەيتىلسە ، باشقا تاللار پارچىلىنىپ ، تاق يۆنىلىشلىك بولىدۇ.

بۇ تېمپېراتۇرىدا ، DNA 4 خىل ئالاھىدە پرىنتېر ئىشلىتىپ ، تاياقچە يۆتكىلىشچان DNA پولىمېراسىغا تايىنىپ ، تاياقچە يۆتكىلىشچان DNA نىڭ بىرىكىشىنى ئۇدا ئۆز-ئارا ئايلاندۇرىدۇ.

ئالدى بىلەن نىشان گېنىدىكى F3 ، F2 ، F1 ، B1 ، B2 ، B3 دىن ئىبارەت 6 كونكرېت رايوننى ئېنىقلاڭ ، ئاندىن بۇ 6 كونكرېت رايونغا ئاساسەن 4 دەسلەپكى لايىھەنى لايىھىلەڭ (تۆۋەندىكى رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك):

ئالدى ئىچكى كۆرسەتكۈچ (FIP) F1c ۋە F2 دىن تەركىب تاپقان.

قالاق ئىچكى پىرىزما (BIP) B1c ۋە B2 دىن تەركىب تاپقان ، TTTT ئوتتۇرىدا بوشلۇق ئورنىدا ئىشلىتىلىدۇ.

سىرتقى پىرىسلاش F3 ۋە B3 ئايرىم-ئايرىم ھالدا نىشان گېندىكى F3 ۋە B3 رايونلىرىدىن تەركىب تاپقان.

LAMP رېئاكسىيە سىستېمىسىدا ، ئىچكى پىرىماتنىڭ قويۇقلۇقى تاشقى پرىزورنىڭ نەچچە ھەسسىسىگە توغرا كېلىدۇ.ئىچكى پىرىزما ئالدى بىلەن قېلىپ تاسمىسى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ ، تولۇقلىما بەلۋاغنى بىرىكتۈرۈپ ، DNA قوش سىزىق ھاسىل قىلىدۇ.ئۇنىڭدىن كېيىن ، سىرتقى پىرىزما قېلىپ قېپى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ ، DNA قوش سىزىق ھاسىل قىلىدۇ.BstDNA پولىمېرازانىڭ ھەرىكىتىگە ئاساسەن ، ئىچكى پىرىسلاش ئارقىلىق بىرىكتۈرۈلگەن تولۇقلىما بەلۋاغ قويۇپ بېرىلىدۇ.بىر قاتار ئىنكاسلاردىن كېيىن ، بىر-بىرىنى تولۇقلايدىغان بەلۋاغ ئاخىرى گاچا قۇرۇلمىسى بىلەن يەككە DNA يولىنى ھاسىل قىلىدۇ.

گاچا قۇرۇلمىسىنىڭ DNA يەككە تاختىسىنىڭ ئۆزى قېلىپ سۈپىتىدە ئۇدا ئوچۇق ئۇچى بىلەن ئۆتكۈنچى غول ئايلانما قۇرۇلما DNA ھاسىل قىلىدۇ.ئىچكى ۋە تاشقى پرىزورلار ئۆتكۈنچى غول ئايلانما قۇرۇلما DNA نى ئۇدا يۆتكىلىش ۋە كېڭەيتىش رېئاكسىيەسىنى باشتىن كەچۈرۈشكە يېتەكلەيدۇ ، ئاخىرىدا ئوخشىمىغان ئۇزۇنلۇقتىكى كۆپ غول ئايلانما قۇرۇلمىنى شەكىللەندۈرىدۇ.DNA ئارىلاشمىسى.

ئايلانما ۋاسىتىلىك ئىسسىقلىقنى كۈچەيتىشنىڭ ئەۋزەللىكى ۋە كەمچىلىكى

LAMP نىڭ ئەۋزەللىكى:

.

(2) ئىنكاس ۋاقتى قىسقا ، ئالاھىدىلىكى كۈچلۈك ، ئالاھىدە ئۈسكۈنىلەر تەلەپ قىلىنمايدۇ.

LAMP نىڭ كەمچىلىكى:

(1) پىرىمېرلارغا بولغان تەلەپ ئالاھىدە يۇقىرى.

(2) كۈچەيتىلگەن مەھسۇلاتنى كلونلاش ۋە تەرتىپكە سېلىشقا ئىشلىتىشكە بولمايدۇ ، پەقەت ھۆكۈم قىلىشقىلا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.

(3) كۈچلۈك سەزگۈرلۈك سەۋەبىدىن ، ئاسانلا ئايرودروم ھاسىل قىلىپ ، يالغان ئاكتىپلارنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ۋە سىناق نەتىجىسىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.

Sسودىنىڭ يۆتكىلىشىنى كۈچەيتىش

Strand كۆچۈشنى كۈچەيتىش (SDA) 1992-يىلى تۇنجى قېتىم ئامېرىكىلىق ئالىم ۋالكېر ئوتتۇرىغا قويغان فېرمېنتلىق رېئاكسىيەنى ئاساس قىلغان ۋىرۇسلۇق ئىسسىقلىق ئىسسىقلىق DNA كېڭەيتىش تېخنىكىسى.

SDA نىڭ ئاساسىي سىستېمىسى چەكلەش ئىچكى پەردىسى ، تاياقچە يۆتكىلىش پائالىيىتى بار DNA پولىمېراسى ، ئىككى جۈپ پىرىمېر ، DNTP ۋە كالتسىي ، ماگنىي ئىئونى ۋە بۇففېر سىستېمىسىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.

بەلۋاغنىڭ يۆتكىلىشىنى كۈچەيتىش پرىنسىپى نىشاندىكى DNA نىڭ ئىككى ئۇچىدىكى خىمىيىلىك ئۆزگەرتىلگەن چەكلەش ئىچكى پەردىسىنى تونۇش تەرتىپىنى ئاساس قىلىدۇ.بالىياتقۇ ئىچكى پەردىسى ئۇنىڭ تونۇلۇش ئورنىدىكى تال DNA دىكى بوشلۇقنى ئاچىدۇ ، DNA پولىمېراسى 3 ′ ئاخىرىنى كېڭەيتىپ ، كېيىنكى DNA گۇرۇپپىسىنىڭ ئورنىنى ئالىدۇ.

ئالماشتۇرۇلغان يەككە تال DNA نى دەسلەپكى قەدەمدە بىرلەشتۈرۈپ ، DNA پولىمېراسى ئارقىلىق قوش تالغا كېڭەيتكىلى بولىدۇ.بۇ جەريان ئۇدا تەكرارلىنىدۇ ، شۇڭا نىشان تەرتىپى ئۈنۈملۈك كۈچەيتىلىدۇ.

بەلۋاغنىڭ يۆتكىلىشىنى كۈچەيتىش تېخنىكىسىنىڭ ئەۋزەللىكى ۋە كەمچىلىكى

SDA نىڭ ئارتۇقچىلىقى:

كۈچەيتىش ئۈنۈمى يۇقىرى ، ئىنكاس ۋاقتى قىسقا ، كونكرېتلىقى كۈچلۈك ، ئالاھىدە ئۈسكۈنىلەر تەلەپ قىلىنمايدۇ.

SDA نىڭ كەمچىلىكى:

مەھسۇلاتلار بىردەك ئەمەس ، بەزى تاق ۋە قوش لىنىيىلىك مەھسۇلاتلار ھەمىشە SDA دەۋرىيلىكىدە ئىشلەپچىقىرىلىدۇ ، ئېلېكتروفورېز بايقالغاندا قۇيرۇق مۇقەررەر يۈز بېرىدۇ.

Rolling چەمبىرىكىنى كۈچەيتىش

دومىلىما چەمبەرنى كۈچەيتىش (RCA) دومىلىما چەمبىرەك ئارقىلىق كېسەللىك پەيدا قىلغۇچى جانلىقلارنىڭ DNA نى كۆپەيتىش ئۇسۇلىنى سىزىش ئارقىلىق ئوتتۇرىغا قويۇلغان.ئۇ تاق يۆنىلىشلىك ئايلانما DNA نى دائىملىق تېمپېراتۇرىدا قېلىپ قىلىپ ئىشلىتىشنى ، ھەمدە ئالاھىدە DNA پولىمېرازا (Phi29 غا ئوخشاش) دومىلاش چەمبىرىكى DNA بىرىكتۈرۈش ھەرىكىتىنىڭ نىشانلىق گېننىڭ كۈچىيىشىنى قولغا كەلتۈرۈشنى كۆرسىتىدۇ.

RCA نى سىزىقلىق كېڭەيتىش ۋە كۆرسەتكۈچ كېڭەيتىش دەپ ئايرىشقا بولىدۇ.سىزىقلىق RCA نىڭ ئۈنۈمى 10 گە يېتىدۇ⁵ۋاقىت ، كۆرسەتكۈچ RCA نىڭ ئۈنۈمى 10 غا يېتىدۇ⁹times.

ئاددىي پەرقلەندۈرۈش ، تۆۋەندىكى رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك ، سىزىقلىق كۈچەيتكۈچتە پەقەت 1 پىرىسلا ئىشلىتىلىدۇ ، كۆرسەتكۈچ كۈچەيتكۈچ b نىڭ 2 پىرىس بار.

Linear RCA يەنە يەككە پىرىس RCA دەپمۇ ئاتىلىدۇ.بىر قەغەز ئايلانما DNA بىلەن باغلىنىدۇ ۋە DNA پولىمېراسىنىڭ رولى بىلەن ئۇزارتىلىدۇ.بۇ مەھسۇلات بىر سىزىقلىق يەككە تال بولۇپ ، كۆپ قېتىم تەكرارلانغان تەرتىپلەر بىر ئايلانما ئۇزۇنلۇقنىڭ نەچچە مىڭ ھەسسىسىگە تەڭ.

سىزىقلىق RCA نىڭ مەھسۇلاتى باشتىن-ئاخىر باشلىنىش قەغىزىگە ئۇلىنىدىغان بولغاچقا ، سىگنالنىڭ ئاسان ئوڭشىلىشى ئاساسلىق ئەۋزەللىك.

Exponential RCA يەنە Hyper شاخلانغان كۈچەيتكۈچ HRCA (Hyper شاخلانغان RCA) دەپمۇ ئاتىلىدۇ ، كۆرگەزمە خاراكتېرلىك RCA دا ، بىر دەسلەپكى كۆرسەتكۈچ RCA مەھسۇلاتىنى كۈچەيتىدۇ ، ئىككىنچى كۆرسەتكۈچ RCA مەھسۇلاتى بىلەن بىرىكىدۇ ۋە كېڭەيتىلىدۇ ، ئالماشتۇرۇش ئاللىقاچان RCA مەھسۇلاتى بىلەن باغلىنىدۇ تۆۋەنكى ئېقىندىكى پىرىسلاش ئەسۋابلىرى كېڭەيتىلىدۇ ، ھەمدە كېڭەيتىش ۋە ئالماشتۇرۇش ئارقىلىق قايتا-قايتا كېڭەيتىش ۋە ئالماشتۇرۇش.

دومىلاش چەمبىرىكى يادرو كىسلاتاسىنى كۈچەيتىشنىڭ ئەۋزەللىكى ۋە كەمچىلىكى

RCA نىڭ ئەۋزەللىكى:

يۇقىرى سەزگۈرلۈك ، ئېنىقلىق ۋە مەشغۇلات ئاسان.

RCA نىڭ كەمچىلىكى:

سىگنال بايقاش جەريانىدا ئارقا كۆرۈنۈش مەسىلىسى.RCA رېئاكسىيەسى جەريانىدا ، تەكشۈرۈلمىگەن قۇلۇپ تەكشۈرۈش ئەسۋابى ۋە باغلانمىغان تەكشۈرۈشنىڭ قېلىپى DNA ياكى RNA بەزى تەگلىك سىگناللارنى ھاسىل قىلىشى مۇمكىن. 

Nucleicacid تەرتىپىنى ئاساس قىلغان كۈچەيتىش

يادرو كىسلاتاسى تەرتىپىنى ئاساس قىلغان كۈچەيتىش (NASBA) PCR ئاساسىدا ياسالغان يېڭى تېخنىكا.ئۇ ئۈزلۈكسىز ۋە ئىسسىقلىق ئىسسىقلىق يادرو كىسلاتاسىنى كۈچەيتىش بولۇپ ، T7 تەشۋىقات تەرتىپى بىلەن بىر جۈپ پىرىمېر يېتەكلەيدۇ.بۇ تېخنىكا تەخمىنەن 2 سائەت ئىچىدە RNA قېلىپىنى تەخمىنەن 109 ھەسسە ئاشۇرالايدۇ ، بۇ ئادەتتىكى PCR ئۇسۇلىدىن 1000 ھەسسە يۇقىرى ، ئالاھىدە ئۈسكۈنىلەرگە ئېھتىياجلىق ئەمەس.

بۇ تېخنىكا كېسەللىك پەيدا بولغان ھامان تېز دىئاگنوز قويۇشقا ئىشلىتىلگەن بولۇپ ، ھازىر نۇرغۇن شىركەتلەر RNA تەكشۈرۈش ئەسۋابىدا بۇ ئۇسۇلنى قوللانغان.

گەرچە RNA كېڭەيتىش يەنە تەتۈر كۆچۈرۈلگەن PCR تېخنىكىسىنى ئىشلىتەلەيدىغان بولسىمۇ ، NASBA نىڭ ئۆزىگە خاس ئەۋزەللىكى بار: ئۇ بىر قەدەر تۇراقلىق تېمپېراتۇرا شارائىتىدا ئېلىپ بېرىلسا بولىدۇ ، ئۇ ئەنئەنىۋى PCR تېخنىكىسىغا قارىغاندا تېخىمۇ مۇقىم ۋە توغرا.

رېئاكسىيە 41 سېلسىيە گرادۇس بولۇپ ، AMV (قۇش مېيلوبلاستوز ۋىرۇسى) تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ، RNase H ، T7 RNA پولىمېراسى ۋە بىر جۈپ پىرىمېرنى تاماملاشنى تەلەپ قىلىدۇ.

بۇ جەريان ئاساسلىقى:

ئالدى كۆرسەتكۈچتە T7 تەشۋىق قىلغۇچىنىڭ تولۇقلاش تەرتىپى بار.رېئاكسىيە جەريانىدا ، ئالدى پىرىزما RNA بەلبېغىغا باغلىنىپ ، AMV ئېنزىمنىڭ تۈرتكىسىدە DNA-RNA قوش سىزىق ھاسىل قىلىدۇ.

RNase H ئارىلاشما قوش لىنىيىدىكى RNA نى ھەزىم قىلىپ ، تاق لىنىيىلىك DNA نى ساقلاپ قالىدۇ.

تەتۈر پىرىسلاش ۋە AMV ئېنزىمنىڭ ھەرىكىتى ئاستىدا ، T7 تەشۋىقات تەرتىپىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان DNA قوش سىزىق شەكىللىنىدۇ.

T7 RNA پولىمېراسىنىڭ ھەرىكىتىگە ئاساسەن ، كۆچۈرۈش جەريانى تاماملىنىپ ، زور مىقداردىكى نىشان RNA ئىشلەپچىقىرىلىدۇ.

NASBA نىڭ ئەۋزەللىكى:

(1) ئۇنىڭ دەسلەپكى قەغىزىدە T7 تەشۋىقاتچىلار تەرتىپى بار ، ئەمما چەتئەل قوش لىنىيىلىك DNA نىڭ T7 تەشۋىق قىلغۇچى تەرتىپى يوق ، ئۇنى كۈچەيتكىلى بولمايدۇ ، شۇڭا بۇ تېخنىكىنىڭ يۇقىرى ئېنىقلىق ۋە سەزگۈرلۈك بار.

(2) NASBA تەتۈر كۆچۈرۈش جەريانىنى بىۋاسىتە كۈچەيتىش ئىنكاسىغا سىڭدۈرۈپ ، ئىنكاس ۋاقتىنى قىسقارتىدۇ.

NASBA نىڭ كەمچىلىكى:

(1) رېئاكسىيە زاپچاسلىرى تېخىمۇ مۇرەككەپ.

(2) رېئاكسىيە تەننەرخىنى يۇقىرى كۆتۈرۈش ئۈچۈن ئۈچ خىل ئېنزىم تەلەپ قىلىنىدۇ.