PCR, كۆپ PCR, PCR دا, PCR نى قايتۇرۇڭ, RT-PCR, qPCR （1）-PCR

بىز ھەر خىل PCR نىڭ ئۇقۇملىرى ، قەدەملىرى ۋە تەپسىلاتلىرىنى رەتلەيمىز

Ⅰ. PCR

پولىمېرازا زەنجىرسىمان ئىنكاسى PCR دەپ ئاتىلىدۇ ، مولېكۇلا بىئولوگىيىلىك تېخنىكا بولۇپ ، ئالاھىدە DNA پارچىلىرىنى چوڭايتىشقا ئىشلىتىلىدۇ.ئۇنى ۋىرۇستا ئالاھىدە DNA كۆپەيتىش دەپ قاراشقا بولىدۇ.DNA پولىمېراسى (DNA Polymerase I) 1955-يىلىلا بايقالغان ، تەجرىبە قىممىتى ۋە قوللىنىشچانلىقى بولغان E. Coli نىڭ Klenow پارچىسى 1970-يىللارنىڭ بېشىدا دوكتور خ.كلېنوۋ تەرىپىدىن بايقالغان ، ئەمما بۇ ئېنزىم تېمپېراتۇرىغا بەرداشلىق بېرەلمىگەچكە ، يۇقىرى تېمپېراتۇرا تۆۋەنلەش بىلەن پولىمېرازا زەنجىرىنىڭ ئىنكاسىغا ماس كەلمەيدۇ.بۈگۈنكى كۈندە ئىشلىتىلىۋاتقان فېرمېنتلار (تاق پولىمېرازا دەپ ئاتىلىدۇ) 1976-يىلى ئىسسىق بۇلاق باكتېرىيەسى تېرمۇس سۇ جانلىقلىرىدىن ئايرىۋېتىلدى. ئۇنىڭ ئالاھىدىلىكى شۇكى ، ئۇ يۇقىرى تېمپېراتۇرىغا قارشى تۇرالايدۇ ۋە كۆڭۈلدىكىدەك ئېنزىم ، ئەمما ئۇ 1980-يىللاردىن كېيىن كەڭ كۆلەمدە ئىشلىتىلگەن.PCR نىڭ ئەسلى ئىپتىدائىي ئەسلى مودېلىنىڭ ئەسلى ئۇقۇمى گېن رېمونت قىلىش ۋە كۆپەيتىشكە ئوخشايدۇ ، ئۇ 1971-يىلى دوكتور KJell Kleppe تەرىپىدىن ئوتتۇرىغا قويۇلغان. ئۇ تۇنجى ئاددىي ۋە قىسقا مۇددەتلىك گېن كۆپەيتىلگەن نۇسخىسىنى ئېلان قىلدى (PCR نىڭ ئالدىنقى ئىككى دەۋرىيلىك ئىنكاسىغا ئوخشايدۇ).بۈگۈن PCR تەتقىق قىلىپ چىققان ، دوكتور Kary B. Mullis 1983-يىلى تەتقىق قىلىپ چىققان. دوكتور مۇلىس شۇ يىلى PE شىركەتلىرىگە مۇلازىمەت قىلغان ، شۇڭا PE نىڭ PCR ساھەسىدە ئالاھىدە ئورنى بار.دوكتور مۇلىس 1985-يىلى سەيكى ۋە باشقىلار بىلەن تۇنجى مۇناسىۋەتلىك قەغەزنى رەسمىي ئېلان قىلدى. شۇنىڭدىن كېيىن ، PCR نى ئىشلىتىش كۈنىگە نەچچە مىڭ ئىنگلىز مىلى كېلىدۇ ، مۇناسىۋەتلىك ماقالىلەرنىڭ سۈپىتىنى باشقا نۇرغۇن تەتقىقات ئۇسۇللىرىنى ياقتۇرمايدۇ دېيىشكە بولىدۇ.ئۇنىڭدىن كېيىن ، PCR تېخنىكىسى بىئولوگىيىلىك ئىلمىي تەتقىقات ۋە كلىنىكىلىق قوللىنىشتا كەڭ قوللىنىلىپ ، مولېكۇلا بىئولوگىيە تەتقىقاتىنىڭ ئەڭ مۇھىم تېخنىكىسىغا ئايلاندى.مۇلىس يەنە 1993-يىللىق نوبېل خىمىيىلىك مۇكاپاتىغا ئېرىشتى.

PCRپرىنسىپ

PCR تېخنىكىسىنىڭ ئاساسىي پرىنسىپى DNA نىڭ تەبىئىي كۆپەيتىش جەريانىغا ئوخشايدۇ ، ئۇنىڭ ئالاھىدىلىكى نىشان تەرتىپىنىڭ ئىككى ئۇچىنى تولۇقلايدىغان ئولىگونوكلېئوتىد پىرىمېرغا باغلىق.PCR چېكىنىش-يېپىشتۇرۇشنى كېڭەيتىشتىن ئىبارەت ئۈچ خىل ئاساسلىق ئىنكاس باسقۇچىدىن تەركىب تاپقان: em قېلىپ DNA نىڭ ھاسىل بولۇشى: قېلىپ DNA مەلۇم ۋاقىتقىچە تەخمىنەن 93 سېلسىيە گرادۇس ئەتراپىدا قىزىتىلغاندىن كېيىن ، قېلىپ DNA ئايرىلىشىنىڭ PCR كۈچەيتىلىشىدىن شەكىللەنگەن قوش زەنجىرسىمان DNA نىڭ قوش DNA ھەل قىلىنىشى ئۇنى بىر زەنجىرگە ئايلاندۇرۇپ ، كېيىنكى باسقۇچلۇق ئىنكاسقا تەييارلىق قىلالايدۇ.A قېلىپ DNA ۋە قەغەزنىڭ تۇتاشتۇرۇلۇشى (بىرىكمىسى): قېلىپ DNA قىزىتىلىپ بىر زەنجىرگە ئايلانغاندىن كېيىن ، تېمپېراتۇرا ° C 55 ئەتراپىدا تۆۋەنلەيدۇ.پىرىزما ۋە قېلىپ DNA تولۇق زەنجىرىنىڭ تولۇقلاش تەرتىپى.The پىرىماتورنىڭ كېڭىيىشى: DNA قېلىپى - دەسلەپكى باغلاش TaqDNA پولىمېرازانىڭ ھەرىكىتىنى ئاساس قىلىدۇ ، DNTP بولسا رېئاكسىيە خام ئەشياسى.كۆپەيتىش پرىنسىپىنى ساقلاڭ ، قېلىپ DNA زەنجىرىنى تولۇقلايدىغان يېڭى يېرىم زاپاس كۆپەيتىلگەن زەنجىرنى بىرىكتۈرۈڭ ، قايتا-قايتا دەۋرىيلىك چېكىنىش-تۇتاشتۇرۇش كېڭەيتىش ئۈچ جەريان تېخىمۇ كۆپ «يېرىم زاپاس كۆپەيتىلگەن زەنجىر» گە ئېرىشەلەيدۇ ، بۇ يېڭى زەنجىر يەنە بىر قېتىم كېيىنكى دەۋرىيلىكنىڭ قېلىپىغا ئايلىنىدۇ.ئايلانما ئايلىنىشنى تاماملاش ئۈچۈن 2-4 مىنۇت ۋاقىت كېتىدۇ ، نىشان گېنىنى 2-3 سائەتتە بىر قانچە مىليون قېتىم كۆپەيتكىلى بولىدۇ.

ئۆلچەملىكPCRئىنكاس سىستېمىسى

PCR ئىنكاسىنىڭ بەش ئامىلى

PCR ئىنكاسىغا ئاساسلىقى بەش خىل ماددا بار ، ئۇلار پىرىمېر ، ئېنزىم ، DNTP ، قېلىپ ۋە بۇففېر (Mg2 + تەلەپ قىلىنىدۇ).[PCR تەرتىپى]

ئۆلچەملىك PCR جەريانى ئۈچ باسقۇچقا بۆلىنىدۇ

1. DNA نىڭ چېكىنىشى (90 ° C-96 ° C): ئىسسىقلىق ھەرىكىتىنىڭ قوش زەنجىرسىمان DNA قېلىپى ، ھىدروگېن رىشتىسى بۇزۇلۇپ ، بىر زەنجىرسىمان DNA شەكىللىنىدۇ.

2. تۇتاشتۇرۇش (25 ℃ -65 ℃): سىستېمىنىڭ تېمپېراتۇرىسى تۆۋەنلەيدۇ ، دەسلەپكى كۆرسەتكۈچ DNA قېلىپى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ يەرلىك قوش زەنجىر ھاسىل قىلىدۇ.

3. كېڭەيتىش (70 ℃ -75 ℃): تاق فېرمېنتى (تەخمىنەن 72 سېلسىيە گرادۇس ، ئەڭ ياخشى پائالىيەت) نىڭ تەسىرىدە ، DNTP خام ئەشيا سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدۇ ، دەسلەپكى 5 ′ ئاخىرىدىن ′ 3 ′ ئاخىرىغىچە سوزۇلۇپ ، بىرىكتۈرۈش ۋە قېلىپ بىر-بىرىنىڭ DNA زەنجىرىنى تولۇقلايدۇ.

ھەر بىر دەۋرىيلىك ئايرىلىدۇ ، ئۇلىنىدۇ ۋە كېڭەيتىلىدۇ ، DNA مەزمۇنى بىر ھەسسە قاتلىنىدۇ.ھازىر ، كېڭەيتىش دائىرىسى قىسقا بولغانلىقتىن ، بەزى PCR تاك فېرمېنتى پائالىيىتى ئەڭ ياخشى بولمىسىمۇ ناھايىتى قىسقا ۋاقىت ئىچىدە كۆپەيتكىلى بولىدۇ ، شۇڭا ئۇنى ئىككى باسقۇچقا ئۆزگەرتىشكە بولىدۇ ، يەنى ئۇلاش ۋە كېڭەيتىش بىرلا ۋاقىتتا 60 ° C-65 ° C قا يېتىدۇ.كۆتۈرۈش ۋە سوۋۇتۇش جەريانىنى ئازايتىش ۋە ئىنكاس سۈرئىتىنى ياخشىلاش ئۈچۈن.

PCR رېئاكسىيە ئىقتىدارى

● يۇقىرى ئېنىقلىق

PCR ئىنكاسىنىڭ كونكرېت ھەل قىلغۇچ ئامىللىرى: prim دەسلەپكى كۆرسەتكۈچ بىلەن قېلىپ DNA نىڭ كونكرېت بىرىكىشى.Base ئاساسى جۈپلىشىش پرىنسىپى.Ta TaqDNA پولىمېرازا بىرىكمە ئىنكاسىنىڭ ساداقەتمەنلىكى.The نىشانلىق گېننىڭ ئالاھىدىلىكى ۋە مۇتەئەسسىپلىكى.

دەسلەپكى ۋە قېلىپلارنى توغرا بىرلەشتۈرۈش ئاچقۇچ.قەغەز بىلەن قېلىپنىڭ باغلىنىشى ۋە دەسلەپكى زەنجىرنىڭ كېڭىيىشى ئىشقارلىق ئاساسى ماسلاشتۇرۇش پرىنسىپىنى ئاساس قىلىدۇ.پولىمېرازا بىرىكتۈرۈش ئىنكاسىنىڭ ساداقەتمەنلىكى ۋە تاق DNA پولىمېراسىنىڭ يۇقىرى تېمپېراتۇرىغا چىدامچانلىقى قېلىپ ۋە پىرىمېرنىڭ باغلىنىشى (بىرىكمىسى) نى تېخىمۇ يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا قىلغىلى بولىدۇ.بىرلەشتۈرۈشنىڭ ئالاھىدىلىكى زور دەرىجىدە ئاشتى.قىستۇرما يۇقىرى دەرىجىدىكى توغرىلىقنى ساقلاپ قالالايدۇ.مۇتەئەسسىپلىكى يۇقىرى ، مۇتەئەسسىپلىكى يۇقىرى بولغان نىشانلىق گېن رايونىنى تاللاش ئارقىلىق ، ئۇنىڭ ئالاھىدىلىكى تېخىمۇ يۇقىرى بولىدۇ.

● يۇقىرى سەزگۈرلۈك

PCR مەھسۇلاتلىرىنىڭ ئىشلەپچىقىرىش مىقدارى كۆرسەتكۈچ ئارقىلىق ئاشۇرۇلىدۇ ، بۇ Picker (PG = 10-12) نىڭ باشلىنىش قېلىپىنى كېڭەيتىپ ، مىكرو كونتروللىغۇچنىڭ سەۋىيىسىنى مىكروگرام (μg = -6) دەرىجىسىگە يەتكۈزىدۇ.نىشانلىق ھۈجەيرىلەرنى 1 مىليون ھۈجەيرىدىن بايقىغىلى بولىدۇ.ۋىرۇسلارنى بايقىغاندا ، PCR نىڭ سەزگۈرلۈكى 3 RFU (قۇرۇق داغ شەكىللەنگەن ئورۇن) غا يېتىدۇ.باكتېرىيە ئىلمىدىكى ئەڭ تۆۋەن بايقاش نىسبىتى 3 باكتېرىيە.

● ئاددىي ۋە تېز

PCR ئەكىس ئەتتۈرۈشتە يۇقىرى تېمپېراتۇرىلىق Taq DNA پولىمېراسى ئىشلىتىلگەن بولۇپ ، ئۇ بىرلا ۋاقىتتا ئىنكاس ھەل قىلىش چارىسىنى قوشىدۇ ، يەنى DNA كۈچەيتكۈچ ئېرىتمىسى ۋە سۇ مۇنچىسى قازاندىكى چېكىنىش-ئانانىزىمنى كېڭەيتىش رېئاكسىيەسى.ئادەتتە ، كۈچەيتىش ئىنكاسى 2 سائەتتىن 4 سائەتكىچە تاماملىنىدۇ.كۈچەيتىلگەن مەھسۇلاتلار ئادەتتە ئېلېكترونلۇق قىلىچ ئارقىلىق ئانالىز قىلىنىدۇ ، ئىزوتوپ ئىشلىتىشنىڭ ھاجىتى يوق ، رادىئوئاكتىپلىق بۇلغىنىش ۋە ئاسان تەشۋىق قىلىش كېرەك.

● ئەۋرىشكىنىڭ ساپلىقى تۆۋەن

ۋىرۇس ياكى باكتېرىيە ۋە مەدەنىيەت ھۈجەيرىسىنى ئايرىشنىڭ ھاجىتى يوق.DNA خام نېفىت مەھسۇلاتلىرى ۋە RNA نى كۈچەيتكۈچ ئورنىدا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.DNA كۈچەيتكۈچ بايقاشنى قان ، بەدەن سۇيۇقلۇقى ، يۆتەل يۇيۇش سۇيۇقلۇقى ، چاچ ، ھۈجەيرە ۋە ھاياتلىق توقۇلمىلىرى قاتارلىق كلىنىكىلىق ئەۋرىشكەلەردىن بىۋاسىتە ئىشلىتىشكە بولىدۇ.

PCRكۆپ ئۇچرايدىغان مەسىلىلەر

Negative سەلبىي مەنپىي ، كۈچەيتىلگەن بەلۋاغ يوق

PCR ئىنكاسىنىڭ ئاچقۇچلۇق باسقۇچلىرى تۆۋەندىكىلەرنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ: temp قېلىپلىق يادرو كىسلاتاسى تەييارلاش ، prim پىرىمېرلارنىڭ سۈپىتى ۋە ئالاھىدىلىكى ، en ئېنزىمنىڭ سۈپىتى ④ PCR دەۋرىيلىك شارائىتى.سەۋەبىنى تېپىشمۇ يۇقىرىدىكى ئۇلىنىشلار ئۈچۈن تەھلىل قىلىنىشى ۋە تەتقىق قىلىنىشى كېرەك.

قېلىپلار: template قېلىپتا ھەر خىل ئاقسىل بار ، template قېلىپتا Taq ئېنزىم چەكلىگۈچى بار ، the قېلىپتىكى ئاقسىل يوقىتىلمايدۇ ، بولۇپمۇ خروموسومدىكى گۇرۇپپا ئاقسىلى.⑤ دېمىنېر يادرو كىسلاتاسىنىڭ چېكىنىشى ئەتراپلىق ئەمەس.فېرمېنت ۋە پىرىمېرلارنىڭ سۈپىتى ياخشى بولغاندا ، كۈچەيتمە بەلۋاغ بولمايدۇ ، بۇ ئەۋرىشكىلەرنىڭ ھەزىم قىلىش ئۇسۇلى بولۇشى مۇمكىن.قېلىپنىڭ يادرو كىسلاتاسىنى ئېلىش جەريانىدا خاتالىق بار ، شۇڭا ئۈنۈملۈك ۋە مۇقىم ھەزىم قىلىش چارىسىنى تەييارلاش ئۈچۈن ، ئۇنىڭ تەرتىپىنى ئوڭشاپ ، خالىغانچە ئۆزگەرتمەسلىك كېرەك.

فېرمېنتنىڭ ئاكتىپسىزلىنىشى: يېڭى ئېنزىم ياكى كونا ۋە يېڭى فېرمېنتلارنى بىرلىكتە ئىشلىتىپ ، فېرمېنت پائالىيىتىنىڭ يوقاپ كەتكەن ياكى يېتەرلىك ئەمەسلىكىنى تەھلىل قىلىپ ، يالغان پاسسىپلىقنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.دىققەت قىلىشقا تېگىشلىكى شۇكى ، تاق ئېنزىم ياكى ئېتىدىئوم برومىد بەزىدە ئۇنتۇلۇپ كېتىدۇ.

پىرىمېر: پىرىماتنىڭ سۈپىتى ، پىرىماتنىڭ قويۇقلۇقى ۋە ئىككى پىرىماتنىڭ قويۇقلۇقى سىممېترىك.PCR مەغلۇبىيىتى ياكى كۆپىيىۋاتقان بەلۋاغ كۆڭۈلدىكىدەك ئەمەس ھەمدە تارقىلىشقا مايىل.بەزى تۈركۈمدىكى سانلارنىڭ دەسلەپكى سۈپىتىدە مەسىلە بار.بۇ ئىككى پىرىمېرنىڭ قويۇقلۇقى يۇقىرى ، قويۇقلۇقى تۆۋەن بولۇپ ، تۆۋەن ئۈنۈملۈك سىممېترىك كۈچەيتمەسلىكنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.تاقابىل تۇرۇش تەدبىرلىرى: units ئورۇنلارنى بىرىكتۈرۈش ئۈچۈن ياخشى بولغان دەسلەپكى تاللاشنى تاللاڭ.The پىرىمېرنىڭ قويۇقلۇقى OD قىممىتىگە باغلىق بولۇپلا قالماي ، يەنە پىرىمېرنىڭ ئەسلىدىكى سۇيۇقلۇقىغا دىققەت قىلىپ ، ئاگار شېكەر گېلى ئېلېكتروفورېز ھاسىل قىلىدۇ.چوقۇم دەسلەپكى بەلۋاغ رايونى بولۇشى كېرەك ، ئىككى پىرىمېرنىڭ يورۇقلۇقى ئادەتتە بىردەك بولۇشى كېرەك.بەلۋاغ ، PCR بۇ ۋاقىتتا مەغلۇپ بولۇشى مۇمكىن ، ئۇنى دەسلەپكى بىرىكتۈرۈش بىرلىكى بىلەن ھەل قىلىش كېرەك.ئەگەر پىرىمات يۇقىرى بولسا ، يورۇقلۇق دەرىجىسى تۆۋەن بولىدۇ ، سۇيۇلغاندا چوقۇم قويۇقلۇقى تەڭپۇڭ بولۇشى كېرەك.③ پىرىماتورغا پۇل تۆلەپ يۇقىرى قويۇقلۇقتا ساقلاش كېرەك ، توڭلاتقۇنىڭ كۆپ قېتىم مۇزلاش ياكى ئۇزۇن مۇددەت توڭلىتىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش كېرەك ، بۇ قەغەزنىڭ ناچارلىشىشىنى ۋە ناچارلىشىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.The پىرىمېرنىڭ لايىھىسى ئەقىلگە سىغمايدۇ ، مەسىلەن پرېرېرنىڭ ئۇزۇنلۇقى يېتەرلىك ئەمەس ، پىرىسلار ئارىسىدا دى گۇرۇپپىسى شەكىللىنىدۇ.

Mg2 + قويۇقلۇقى: Mg2 + ئىئون قويۇقلۇقى PCR كۈچەيتىش ئۈنۈمىگە زور تەسىر كۆرسىتىدۇ.ھەددىدىن زىيادە مەركەزلىشىش PCR كېڭەيتىشنىڭ يات جىنىسلىرىنى ئازايتالايدۇ.ئەگەر قويۇقلۇقى بەك تۆۋەن بولسا ، PCR كۈچەيتكۈچ چىقىرىش ھەتتا كېڭەيتىش بەلبېغى بولمىسا PCR كېڭەيتىش مەغلۇبىيىتىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.

ئىنكاس مىقدارىنىڭ ئۆزگىرىشى: PCR كېڭەيتىشتە ئىشلىتىلىدىغان ھەجىم 20ul ، 30ul ۋە 50ul ياكى 100uL ، PCR كېڭەيتىش ئىلتىماسىنىڭ زور ھەجىمى ئوخشىمىغان ئىلمىي تەتقىقات ۋە كلىنىكىلىق سىناقنىڭ مەقسىتىگە ئاساسەن بېكىتىلگەن.20ul غا ئوخشاش كىچىك ھەجىملەرنى ياسىغاندىن كېيىن ، چوڭ-كىچىكلىكىنى ياسىغاندا سىم سىمى ئورنىتىش كېرەك ، بولمىسا مەغلۇپ بولىدۇ.

فىزىكىلىق سەۋەبلەر: PCR كېڭەيتىشتە ئۆزگەرتىش ئىنتايىن مۇھىم.ئەگەر چېكىنىش تېمپېراتۇرىسى تۆۋەن بولسا ، چېكىنىش ۋاقتى قىسقا بولسا ، يالغان سەلبىي تەرەپلەردە كۆرۈلۈشى مۇمكىن.بەك تۆۋەن تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى ئالاھىدە بولمىغان كۈچەيتىشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ۋە كونكرېت كۈچەيتىش ئۈنۈمىنى تۆۋەنلىتىدۇ.پىرىسلاش ۋە قېلىپلارنىڭ بىرىكىشىگە زور تەسىر كۆرسىتىپ ، PCR كۈچەيتىش ئۈنۈمىنى تۆۋەنلىتىدۇ.بەزىدە ئۆلچەملىك تېرمومېتىر ئىشلىتىپ ، كېڭەيتىش ياكى سۇدا ئېرىيدىغان قازاندا ئۆزگىرىشچانلىقى ، تۇتاشتۇرۇش ۋە كېڭەيتىلگەن تېمپېراتۇرىنى بايقاشقا توغرا كېلىدۇ ، بۇ PCR نىڭ مەغلۇب بولۇشىدىكى سەۋەبلەرنىڭ بىرى.

نىشان تەرتىپىنىڭ ئۆزگىرىشچانلىقى: ئەگەر نىشان تەرتىپى يۈز بەرگەندە ، ئۆزگىرىش ياكى ئۆچۈرۈلسە ، ئەسلى تىپ بىلەن قېلىپنىڭ بىرىكىشى بىرلەشتۈرۈلسە ياكى نىشان تەرتىپىنىڭ كەملىكى سەۋەبىدىن ، دەسلەپكى كۆرسەتكۈچ ۋە قېلىپ تولۇقلاش تەرتىپىنى يوقىتىدۇ ، ئۇنىڭ PCR كۈچەيتىشى مۇۋەپپەقىيەتلىك بولمايدۇ.

مۇسبەت مۇسبەت

PCR كۈچەيتمە بەلۋاغ نىشان تەرتىپلىك بەلۋاغ بىلەن بىردەك كۆرۈنىدۇ ، بەزىدە ئۇنىڭ بەلبېغى تېخىمۇ رەتلىك ۋە تېخىمۇ يۇقىرى بولىدۇ.

دەسلەپكى لايىھىلەش مۇۋاپىق ئەمەس: تاللانغان كۈچەيتمە تەرتىپ ۋە مەقسەتسىز كۈچەيتىش تەرتىپى ئوخشاش بولىدۇ ، شۇڭا PCR كۈچەيتىلگەندە ، كۈچەيتىلگەن PCR مەھسۇلاتلىرى مەقسەتسىز تەرتىپ بولىدۇ.نىشان تەرتىپى بەك قىسقا ياكى قەغەز بەك قىسقا بولۇپ ، ئاسانلا ساختا مۇسبەت بولىدۇ.قايتا لايىھىلەش كېرەك.

نىشان تەرتىپى ياكى كۈچەيتمە مەھسۇلاتلارنىڭ ئۆز-ئارا بۇلغىنىشى: بۇ بۇلغىنىشنىڭ ئىككى سەۋەبى بار: بىرىنچى ، پۈتكۈل گېن ياكى چوڭ بۆلەكلەرنىڭ ئۆز-ئارا بۇلغىنىشى ، يالغان ئاكتىپلارنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.بۇ خىل ساختا مۇسبەتنى تۆۋەندىكى ئۇسۇللار ئارقىلىق ھەل قىلغىلى بولىدۇ: مەشغۇلات جەريانىدا ئېھتىياتچان ۋە مۇلايىم بولۇپ ، نىشان تەرتىپنىڭ ئەۋرىشكە مىلتىققا سۈمۈرۈلۈشى ياكى مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىدىن چىقىپ كېتىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.يۇقىرى تېمپېراتۇرىغا بەرداشلىق بېرەلمەيدىغان فېرمېنت ۋە ماددىلارنى ھېسابقا ئالمىغاندا ، بارلىق رېئاكتور ياكى ئۈسكۈنىلەرنى يۇقىرى بېسىم بىلەن دېزىنفېكسىيە قىلىش كېرەك.مەركەزدىن قاچۇرۇش تۇرۇبىسى ۋە ئەۋرىشكىسىنى بىرلا ۋاقىتتا ئىشلىتىش كېرەك.زۆرۈر تېپىلغاندا ، ئەۋرىشكە قوشۇشتىن بۇرۇن ، رېئاكسىيە نەيچىسى ۋە رېئاكتور ئۇلترا بىنەپشە نۇرنىڭ تەسىرىگە ئۇچراپ ، ھازىرقى يادرو كىسلاتاسىنى يوقىتىدۇ.ئىككىنچىدىن ، ھاۋانىڭ بۇلغىنىشىدىكى كىچىك پارچىلار.بۇ كىچىك پارچىلار نىشان تەرتىپىدىن قىسقا ، ئەمما ئۇلاردا مەلۇم گومولوگىيە بار.ئۇنى بىر-بىرىگە چاپلاشقا بولىدۇ.پىرىسلىغۇچنى تولۇقلىغاندىن كېيىن ، PCR مەھسۇلاتىنى كېڭەيتكىلى بولىدۇ ، بۇ ساختا ئاكتىپ ئىشلەپچىقىرىشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.ئۇۋا PCR ئۇسۇلىنى ئازايتىش ياكى يوقىتىشقا ئىشلىتىلىدۇ.

● ئېنىق بولمىغان كۈچەيتمە بەلۋاغ پەيدا قىلىڭ

PCR كۈچەيتىلگەندىن كېيىن پەيدا بولغان بەلۋاغلار مۆلچەردىكى چوڭ-كىچىكلىكى بىلەن چوڭ ياكى كىچىك ياكى ئوخشاش ۋاقىتتا ياكى ئوخشاش ۋاقىتتا ، ئالاھىدە كۈچەيتمە بەلۋاغ ۋە ئالاھىدە كۈچەيتمە بەلۋاغ بىلەن ماس كەلمەيدۇ.كونكرېت بولمىغان بەلۋاغلارنىڭ پەيدا بولۇشى: بىرىنچى ، پىرىمېرلار نىشان تەرتىپىگە تولۇق تولۇقلانمايدۇ ، ياكى پىرىمېرنىڭ پولىمېرلىشىشى دى گۇرۇپپىسىنى شەكىللەندۈرىدۇ.ئىككىنچى ، MG2 + ئىئوننىڭ قويۇقلۇقى بەك يۇقىرى ، تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى بەك تۆۋەن ، PCR دەۋرىيلىكى بىلەن مۇناسىۋەتلىك.ئىككىنچىدىن ، فېرمېنتلارنىڭ سۈپىتى ۋە مىقدارى.ھەمىشە ، بەزى مەنبەلەردىكى ئېنزىملار ئالاھىدە بولمىغان بەلۋاغقا مايىل بولۇپ ، باشقا مەنبەدىكى ئېنزىملار يۈز بەرمەيدۇ.بەزىدە فېرمېنتنىڭ ئېنىق بولمىغان كۈچەيتىلىشىمۇ كۆرۈلىدۇ.تاقابىل تۇرۇش تەدبىرلىرى: زۆرۈر تېپىلغاندا جەلپ قىلىش كۈچى قايتىدىن لايىھەلەنگەن.ئېنزىمنىڭ مىقدارىنى ئازايتىڭ ياكى باشقا مەنبەنىڭ ئېنزىمنى ئالماشتۇرۇڭ.دەسلەپكى مىقدارنى ئازايتىپ ، قېلىپلارنىڭ سانىنى مۇۋاپىق كۆپەيتىپ ، دەۋرىيلىك سانىنى ئازايتىڭ.تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسىنى مۇۋاپىق ئاشۇرۇش ياكى ئىككى تېمپېراتۇرا نۇقتىسى ئۇسۇلىنى قوللىنىش (93 سېلسىيە گرادۇس تۆۋەنلەش ، تۇتاشتۇرۇش ۋە ° C 65 ئەتراپىدا كېڭىيىش).

Ak تەكشى تاختاي ياكى پۈركۈش لېنتىسى

PCR كېڭەيتىش بەزىدە قوللىنىلغان ياكى قاپلانغان ياكى گىلەمگە ئوخشاش بەلۋاغتەك كۆرۈنىدۇ.بۇنىڭ سەۋەبى ، فېرمېنتنىڭ مىقدارى كۆپ ياكى ئېنزىمنىڭ سۈپىتى ناچار بولغاچقا ، DNTP نىڭ قويۇقلۇقى بەك يۇقىرى ، Mg2 + نىڭ قويۇقلۇقى بەك يۇقىرى ، تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى بەك تۆۋەن ، دەۋرىيلىك سانى بەك كۆپ.قارشى تەدبىرلەر: enzy فېرمېنتنىڭ مىقدارىنى ئازايتىش ياكى باشقا مەنبەنىڭ ئېنزىمنى ئۆزگەرتىش.DNTP نىڭ قويۇقلۇقىنى ئازايتىڭ M Mg2 + قويۇقلۇقىنى مۇۋاپىق تۆۋەنلىتىڭ.Temp قېلىپلارنىڭ سانىنى كۆپەيتىپ ، دەۋرىيلىك سانىنى ئازايتىڭ.

مۇناسىۋەتلىك مەھسۇلاتلار

PCR Heroᵀᴹ (بوياق بىلەن)

Id يۇقىرى ساداقەت: ئادەتتىكى تاق ئېنزىمنىڭ 6 ھەسسىسىگە تەڭ.

Aster تېز سۈرئەتتە كېڭەيتىش سۈرئىتى

◮ تېخىمۇ كۆپ قېلىپنىڭ ماسلىشىشچانلىقى

Ampl تېخىمۇ يۇقىرى كېڭەيتىش ئۈنۈمى

◮ مۇھىتقا بەرداشلىق بېرىش كۈچى تېخىمۇ كۈچلۈك: ° C 37 قا بىر ھەپتە قويۇپ ،% 90 تىن ئارتۇق پائالىيەتنى ساقلايدۇ.

◮ ئۇنىڭدا 5 '→ 3' DNA پولىمېرازا پائالىيىتى ۋە 5 '→ 3' exonuclease پائالىيىتى بار ، 3 '→ 5' exonuclease پائالىيىتى يوق.

PCR Easyᵀᴹ (بوياق بىلەن)

ئۆزگىچە ئىنكاس سىستېمىسى ۋە يۇقىرى ئۈنۈملۈك Taq DNA پولىمېرازى PCR ئىنكاسىنىڭ كۈچەيتىش ئۈنۈمى ، خاسلىقى ۋە سەزگۈرلۈكىنى تېخىمۇ يۇقىرى قىلىدۇ.

RT-qPCR Easyᵀᴹ (بىر قەدەم) -SYBR يېشىل I.

◮ بىر باسقۇچلۇق يۈرۈشلۈك زاپچاسلار تەتۈر ترانسكرىپسىيە ۋە qPCR ئوخشاش بىر تۇرۇبىدا ئىككى خىل ئىنكاس قايتۇرىدۇ ، پەقەت قېلىپ RNA ، كونكرېت PCR پىرىسلىرى ۋە RNase-Free ddH نى قوشۇش كېرەك.₂O.

بۇ زاپچاس ۋىرۇسلۇق RNA نى تېز ۋە ئۈنۈملۈك ھالدا ئانالىز قىلالايدۇ ياكى RNA نى ئىزلىيەلەيدۇ.

Kit بۇ زاپچاسقا ئۆزگىچە Foregene تەتۈر ترانسكرىپسىيە رېئاكتورى ۋە Foregene HotStar Taq DNA Polymerase ئىشلىتىلگەن بولۇپ ، ئۆزگىچە ئىنكاس سىستېمىسى بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ ، ئىنكاسنىڭ كۈچەيتىش ئۈنۈمى ۋە ئالاھىدىلىكىنى ئۈنۈملۈك ئۆستۈرىدۇ.

Optim ئەلالاشتۇرۇلغان ئىنكاس سىستېمىسى ئىنكاسنىڭ بايقاش سەزگۈرلۈكىنى ، ئىسسىقلىقنىڭ مۇقىملىقىنى ۋە تېخىمۇ كەڭ قورساقلىقنى كۈچەيتىدۇ.

◮ RT-qPCR ئاسان^TM.

RT Easy^TMII (Master Premix for ئۈچۈن بىرىنچى قاتاردىكى cDNA بىرىكتۈرۈشReal Time PCR)

-GDNA نى چىقىرىۋېتىشنىڭ ئۈنۈملۈك ئىقتىدارى ، ئۇ 2 مىنۇت ئىچىدە قېلىپتىكى gDNA نى ئۆچۈرەلەيدۇ.

-ئۈچۈن تەتۈر كۆچۈرۈش سىستېمىسى ، بىرىنچى تال CDNA نىڭ بىرىكىشىنى تاماملاشقا پەقەت 15 مىنۇت ۋاقىت كېتىدۇ.

- مۇرەككەپ قېلىپلار: يۇقىرى GC مەزمۇنى ۋە مۇرەككەپ ئىككىلەمچى قۇرۇلمىسى بار قېلىپلارنىمۇ يۇقىرى ئۈنۈم بىلەن قايتۇرغىلى بولىدۇ.

-ئۆز سەزگۈرلۈك تەتۈر ترانسكرىپسىيە سىستېمىسى ، pg دەرىجىلىك قېلىپلارمۇ يۇقىرى سۈپەتلىك cDNA غا ئېرىشەلەيدۇ.

- تەتۈر كۆچۈرۈلۈش سىستېمىسىنىڭ ئىسسىقلىق مۇقىملىقى يۇقىرى ، ئەڭ ياخشى ئىنكاس تېمپېراتۇرىسى 42 and ، ئۇ يەنىلا 50 at لىك تەتۈر كۆچۈرۈش ئىقتىدارىغا ئىگە.