ئەنئەنىۋى تەتۈر كۆچۈرۈلۈش يۇقىرى تېمپېراتۇرىغا بەرداشلىق بېرەلمەيدۇ (MMLV پائالىيىتىنىڭ ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرىسى 37-50 سېلسىيە گرادۇس ، AMV بولسا 42-60 سېلسىيە گرادۇس).تېخىمۇ مۇرەككەپ ۋىرۇسلۇق RNA نى تۆۋەن تېمپېراتۇرىدا ئۈنۈملۈك ھالدا CDNA غا كۆچۈرگىلى بولمايدۇ ، نەتىجىدە بايقاش ئۈنۈمى تۆۋەنلەيدۇ.ئەنئەنىۋى RT-qPCR ئادەتتە ئىككى ئاچقۇچلۇق فېرمېنتنىڭ (تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ۋە DNA پولىمېرازا) قاتنىشىشىنى تەلەپ قىلىدۇ ، بۇ ئىنكاس سىستېمىسىنىڭ مەشغۇلاتىنى ئاددىيلاشتۇرۇپ ، تەننەرخنى تۆۋەنلىتىدۇ.بۇ يەردە TtH ۋە RevTaq دىن ئىبارەت ئىككى يۇقىرى تېمپېراتۇرىغا چىداملىق تەتۈر كۆچۈرۈلگەن نۇسخىسىنى تونۇشتۇرىمىز.بۇ ئىككى خىل ئېنزىمنىڭ DNA پولىمېرازا ئىقتىدارىمۇ بار ، شۇڭا ئۇلار قوش ئىقتىدارلىق ئېنزىم دەپ ئاتىلىدۇ.

TtH DNA پولىمېراسى

سىز چوقۇم تېرموفىللىق باكتېرىيە تېرموس تېرموفىلۇس HB8 دىن ھاسىل بولغان TtH ھەققىدە ئاڭلىغان بولۇشىڭىز كېرەك.Mg2 + غا ئوخشاش ئوخشىمىغان كاتېگورىيە ئالدىدا ، ئۇنىڭ DNA پولىمېرا پائالىيىتى بار.ئۇ تاك فېرمېنتىغا ئوخشاش PCR ئىنكاسىدا كەڭ قوللىنىلىدۇ ، ئەمما ئۇنىڭ ئىسسىقلىققا چىدامچانلىقى Taq ئېنزىمغا قارىغاندا يۇقىرى ، شۇڭا ئۇ يۇقىرى GC مەزمۇن قېلىپى بار PCR غا تېخىمۇ ياخشى تەسىر كۆرسىتىدۇ.

· بۇ ئېنزىمنىڭ ئاساسىي جەھەتتىن 3 ′ → 5 ′ ئېكسپېدىتسىيە پائالىيىتى ۋە 5 ′ → 3 ′ exonuclease پائالىيىتى يوق ، شۇڭا ئۇنى دىئوكسىد تەرتىپلەشكىمۇ ئىشلىتىشكە بولىدۇ.

· بۇ ئېنزىمنىڭ RTase پائالىيىتى بار.Mn2 + نىڭ ئالدىدا ، RTase پائالىيىتى كۈچەيتىلىدۇ.بۇ ئىقتىدارنى ئىشلىتىپ ، ئوخشاش تۇرۇبا ، يەنى بىر باسقۇچلۇق RT-PCR دا تەتۈر كۆچۈرۈلۈش رېئاكسىيەسى ۋە PCR ئىنكاسىنى قىلىشقا بولىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، Mn2 + نىڭ ئالدىدا ، RT-PCR نىڭ توغرىلىق دەرىجىسى يۇقىرى ئەمەس.RT پائالىيىتىنىڭ rnaase H پائالىيىتى بىلەن مۇناسىۋىتى يوق.

Tth-DNA پولىمېرازا (pH9 ، ئەڭ ياخشى + 55 ℃ ～ + 70 ℃ ، ئەڭ يۇقىرى + 95 activity) نىڭ پائالىيىتىنىڭ كۈچىيىشى RNA ئىككىلەمچى قۇرۇلمىسى كەلتۈرۈپ چىقارغان مەسىلىلەرنى يېڭىدۇ.ھاسىل بولغان cDNA نى Mg2 + ئىئونلىرى ئالدىدا ئوخشاش ئېنزىم بىلەن PCR ئارقىلىق كۈچەيتكىلى بولىدۇ.

Tth-DNA پولىمېراسىنىڭ يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ۋە DNA كۈچەيتىش ئىقتىدارى بۇ ئېنزىمنى مىقدارلاشتۇرۇلغان RT-PCR ، كلونلاش ۋە ھۈجەيرە ۋە ۋىرۇسلۇق RNA نىڭ گېن ئىپادىلەش ئانالىزىغا پايدىلىق قىلىدۇ.
Tth-DNA پولىمېراسى RT-PCR ئۈچۈن RNA نى 1kb غا يەتكۈزۈش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ.

ئالاھىدىلىكى ۋە ئەۋزەللىكى

Tth DNA پولىمېراسى:

ئەلالاشتۇرۇلغان پولىمېرازا زەنجىرسىمان ئىنكاسى (PCR) مەھسۇلاتنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىگە كاپالەتلىك قىلىڭ ، RT-PCR ئىنكاسىدا كەم دېگەندە 1000 bp

ئۆزگەرتىلگەن دېئوكسىرىبونۇكلېئوسىد ترىفوسفاتنى تارماق بالا سۈپىتىدە قوبۇل قىلىڭ

• RNase H پائالىيىتى بىلەن مۇناسىۋىتى يوق

• مەسىلىلەرنى يېڭىش ئۈچۈن يۇقىرى ئىسسىقلىق مۇقىملىقى بار ، ئادەتتە RNA دىكى يۇقىرى ئىككىلەمچى قۇرۇلما بىلەن مۇناسىۋەتلىك

RevTaq RT - PCR DNA پولىمېراسى

تەتۈر كۆچۈرۈش پائالىيىتى بىلەن ئىسسىققا چىداملىق DNA پولىمېراسى

RevTaq-RT-PCR-DNA پولىمېراسى ئىنژېنېرلىق ، يۇقىرى ئىسسىقلىققا چىداملىق ، قوش ئىقتىدارلىق فېرمېنت بولۇپ ، تەتۈر كۆچۈرۈلگەن ۋە DNA پولىمېرازا پائالىيىتى يۆنىلىشلىك ۋە سۈنئىي تەدرىجىي تەرەققىيات ئارقىلىق ئېرىشكەن.

Rev RevTaq RT-PCR DNA پولىمېراسىنىڭ يېرىم ئۆمرى 95 سېلسىيە گرادۇستىن ئېشىپ كەتتى.

· RevTaq RT-PCR DNA پولىمېراسى RNA قېلىپىدىن بىۋاسىتە يۇقىرى تېمپېراتۇرىلىق تەتۈر كۆچۈرۈلۈشكە يول قويىدۇ ، تەتۈر كۆچۈرۈش قەدىمىنى كۆپ قېتىم تەكرارلاپ ، تېخىمۇ كۆپ cDNA قېلىپىنى ھاسىل قىلغىلى بولىدۇ.

· RevTaq RT-PCR DNA پولىمېراسى «نۆل باسقۇچلۇق» RT-PCR غا يول قويىدۇ (ئىسسىقلىق قايتۇرۇش تەتۈر كۆچۈرۈش باسقۇچى يوق) ، چۈنكى دەۋرىيلىك PCR كېڭەيتىش باسقۇچىدا ، تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ۋە DNA كېڭەيتىش بىرلا ۋاقىتتا يۈز بېرىدۇ.بۇ يەنە يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ئىنكاسىنى ئىلگىرى سۈرىدۇ ، بۇ ئارقىلىق يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا RNA دىكى كۈچلۈك ئىككىلەمچى قۇرۇلمىنى ئېرىتىشتە يولۇققان مەسىلىلەرنى ئازايتىدۇ.

Aptamer نى ئاساس قىلغان ئىسسىق قوزغىتىش فورمۇلاسى سەۋەبىدىن ، RevTaq RT-PCR DNA پولىمېراسى ئۇلىنىش ۋە كېڭەيتىش تېمپېراتۇرىسى ° C 57 تىن يۇقىرى بولغاندا تېخىمۇ ياخشى ئۈنۈم بېرىدۇ.

· ئېنزىم ئىسسىققا چىداملىق بولغاچقا ، ناھايىتى يۇقىرى ئېرىتىش نۇقتىلىرى (> 60 ° C) بولغان پىرىمېر ۋە تەكشۈرۈش ئەسۋابىنى لايىھىلەش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

· ئىنكاس تەڭشەش جەريانىدا تېمپېراتۇرا تەدرىجىي ھالدا تۇتاشتۇرۇش / كېڭەيتىش باسقۇچىنىڭ تېمپېراتۇرىسىنى ئەلالاشتۇرۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

· تېمپېراتۇرا قانچە يۇقىرى بولسا PCR نىڭ ئالاھىدىلىكى شۇنچە يۇقىرى بولىدۇ.تەتۈر كۆچۈرۈش دەۋرى ئادەتتە PCR دەۋرىگە قارىغاندا تېخىمۇ يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا ئېلىپ بېرىلىدۇ ، چۈنكى DNA Primer: RNA قېلىپنى ئارىلاشتۇرۇش ئادەتتە ئېرىتىش نۇقتىسى DNA Primer غا قارىغاندا يۇقىرى بولىدۇ: cDNA قېلىپ كۆپەيتىش.

· RevTaq RT-PCR DNA پولىمېراسى گېن ئارقىلىق لايىھىلەنگەن ۋە ئەلالاشتۇرۇلغان ، ئامپلوننىڭ چوڭلۇقى 60-300 bp ئارىلىقىدا.

RevTaq RT-PCR DNA پولىمېرازا بايقاش چېكى 4 نۇسخا /

رەسىمدە ئەلالاشتۇرۇلغان ئىنكاس سىستېمىسى (يۇقىرى ئېرىتىش نۇقتىسىنىڭ ئورنىتىلىشى) كۆرسىتىلدى.RevTaq RT-PCR DNA پولىمېرازا ئارقىلىق قوزغىتىلغان RT-PCR TaqPath 1 باسقۇچلۇق RT-qPCR ئاساسىي ئارىلاشتۇرۇشقا قارىغاندا تېخىمۇ سەزگۈرلۈكنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، تۆۋەن تەكشۈرۈش ئەۋرىشكىسى سۇيۇلۇش دەرىجىسى.

تېخىمۇ كۆپ ئارتۇقچىلىقلىرى:

تېز قوزغىتىش ئىقتىدارى → دەسلەپكى ئىسسىقلىق ئايرىش باسقۇچىدىن ئاتلاپ ئۆتۈپ كەتكىلى بولىدۇ.

قىزىق قوزغىتىش ئاپتاپ فورمۇلا immediately% 100 فېرمېنت پائالىيىتىنى دەرھال تەمىنلەپ ، تۆۋەن تېمپېراتۇرىدا (<57 ° C) ئالاھىدە كۈچەيمەسلىكنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.

تازىلاش ئىقتىدارى → RNA ئېلىش باسقۇچى ئەمەلدىن قالدۇرۇلدى ، چۈنكى RevTaq RT-PCR DNA پولىمېراسى يەنە خام رېئاكسىيە ئەۋرىشكىسىنى بىر تەرەپ قىلالايدۇ.ئۇ ئىسسىق RT-PCR دەۋرىيلىكىدىكى ئېۋكارىئوت ، باكتېرىيە ۋە ۋىرۇسلارنىڭ ھۈجەيرە پەردىسىنى دەرھال يوقىتالايدۇ.

IVD خام ئەشيا سەۋىيىسى quality يۇقىرى سۈپەتلىك ئۆلچەم ۋە رىقابەت كۈچى ئىنتايىن يۇقىرى