كۈچەيتمە سىگنالى يوق

1. يۈرۈشلۈك زاپچاستىكى تاق DNA پولىمېراسى زاپچاسنى ساقلاش ياكى ۋاقتى توشماسلىق سەۋەبىدىن پائالىيىتىنى يوقىتىدۇ.
تەۋسىيە: زاپچاسنىڭ ساقلاش شارائىتىنى جەزملەشتۈرۈڭ.PCR سىستېمىسىغا مۇۋاپىق مىقداردا Taq DNA Polymerase نى قوشۇڭ ياكى مۇناسىۋەتلىك تەجرىبە ئۈچۈن يېڭى Real Time PCR Kit نى سېتىۋېلىڭ.

2. DNA قېلىپىدا تاق DNA پولىمېراسىنىڭ چەكلىگۈچىلىرى ناھايىتى كۆپ.
تەكلىپ: قېلىپنى تولۇقلاڭ ياكى ئىشلىتىلگەن قېلىپنىڭ مىقدارىنى ئازايتىڭ.

3. Mg2 + قويۇقلۇقى ماس كەلمەيدۇ.
تەۋسىيە: بىز تەمىنلىگەن 2 × ھەقىقىي PCR Mix نىڭ Mg2 + قويۇقلۇقى 3.5mM.قانداقلا بولمىسۇن ، بەزى ئالاھىدە پىرىسلار ۋە قېلىپلارغا نىسبەتەن Mg2 + قويۇقلۇقى تېخىمۇ يۇقىرى بولۇشى مۇمكىن.شۇڭلاشقا ، بىۋاسىتە MgCl2 نى قوشسىڭىز Mg2 + قويۇقلۇقىنى ئەلالاشتۇرالايسىز.ئەلالاشتۇرۇش ئۈچۈن ھەر قېتىم Mg2 + 0.5mM نى ئاشۇرۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

4. PCR كۈچەيتىش شارائىتى ماس كەلمەيدۇ ، دەسلەپكى تەرتىپ ياكى قويۇقلۇقى مۇۋاپىق ئەمەس.
تەكلىپ: دەسلەپكى تەرتىپنىڭ توغرىلىقىنى جەزملەشتۈرۈڭ ، قەغەزنىڭ بۇزۇلمىغانلىقىئەگەر كۈچەيتىش سىگنالى ياخشى بولمىسا ، قوشۇمچە تېمپېراتۇرىنى تۆۋەنلىتىپ ، دەسلەپكى قويۇقلۇقىنى مۇۋاپىق تەڭشەڭ.

5. قېلىپنىڭ مىقدارى بەك ئاز ياكى بەك كۆپ.
تەۋسىيە: قېلىپ تۈز سىزىقلىق تەدرىجىي سۇيۇلۇشنى ئىجرا قىلىڭ ، ھەمدە ھەقىقىي ۋاقىت PCR تەجرىبىسى ئۈچۈن ئەڭ ياخشى PCR ئۈنۈمى بىلەن قېلىپنىڭ قويۇقلۇقىنى تاللاڭ.

NTC نىڭ فلۇئورېسسېنسىيە قىممىتى بەك يۇقىرى

1. مەشغۇلات جەريانىدا پەيدا بولغان رېئاكتىپ بۇلغىنىش.
تەۋسىيە: Real Time PCR تەجرىبىسى ئۈچۈن يېڭى رېئاكتور بىلەن ئالماشتۇرۇڭ.

2. PCR ئىنكاس سىستېمىسى تەييارلاش جەريانىدا بۇلغىنىش يۈز بەردى.
تەۋسىيە: مەشغۇلات جەريانىدا زۆرۈر بولغان قوغداش تەدبىرلىرىنى قوللىنىڭ ، مەسىلەن: كېچىكىپ پەلەي كىيىش ، سۈزگۈچ بىلەن تۇرۇبا ئۇچى ئىشلىتىش قاتارلىقلار.

3. پىرىمچىكلار تۆۋەنلەيدۇ ، پىرىمېرلارنىڭ ناچارلىشىشى كونكرېت بولمىغان كۈچەيتىشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
تەكلىپ: SDS-PAGE ئېلېكتروفورېز ئىشلىتىپ ، پىرىمېرلارنىڭ بۇزۇلغان ياكى بۇزۇلمىغانلىقىنى ئېنىقلاپ ، ئۇلارنى ھەقىقىي ۋاقىت PCR تەجرىبىسى ئۈچۈن يېڭى پرېرمېرغا ئالماشتۇرۇڭ.

دەسلەپكى ۋاقىت سىزىقى ياكى ئېنىق بولمىغان كۈچەيتىش

1. Mg2 + قويۇقلۇقى ماس كەلمەيدۇ.
تەۋسىيە: بىز تەمىنلىگەن 2 × ھەقىقىي PCR EasyTM Mix نىڭ Mg2 + قويۇقلۇقى 3.5 mM.قانداقلا بولمىسۇن ، بەزى ئالاھىدە پىرىسلار ۋە قېلىپلارغا نىسبەتەن Mg2 + قويۇقلۇقى تېخىمۇ يۇقىرى بولۇشى مۇمكىن.شۇڭلاشقا ، بىۋاسىتە MgCl2 نى قوشسىڭىز Mg2 + قويۇقلۇقىنى ئەلالاشتۇرالايسىز.ئەلالاشتۇرۇش ئۈچۈن ھەر قېتىم Mg2 + 0.5mM نى ئاشۇرۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

2. PCR تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى بەك تۆۋەن.
تەكلىپ: PCR ئۇلىنىش تېمپېراتۇرىسىنى ھەر قېتىم 1 ℃ ياكى 2 by ئۆرلىتىڭ.

3. PCR مەھسۇلاتى بەك ئۇزۇن.
تەۋسىيە: Real Time PCR مەھسۇلاتىنىڭ ئۇزۇنلۇقى 100-150bp ئارىلىقىدا بولۇشى ، 500bp دىن ئېشىپ كەتمەسلىكى كېرەك.

4. پىرىمچىكلار تۆۋەنلەيدۇ ، پىرىمېرلارنىڭ ناچارلىشىشى كونكرېت كۈچەيتىشنىڭ پەيدا بولۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
تەكلىپ: SDS-PAGE ئېلېكتروفورېز ئىشلىتىپ ، پىرىمېرلارنىڭ بۇزۇلغان ياكى بۇزۇلمىغانلىقىنى ئېنىقلاپ ، ئۇلارنى ھەقىقىي ۋاقىت PCR تەجرىبىسى ئۈچۈن يېڭى پرېرمېرغا ئالماشتۇرۇڭ.

5. PCR سىستېمىسى نامۇۋاپىق ، ياكى سىستېما بەك كىچىك.
تەكلىپ: PCR ئىنكاس سىستېمىسى بەك كىچىك بولۇپ ، بايقاشنىڭ توغرىلىقىنى تۆۋەنلىتىدۇ.ئەڭ ياخشىسى مىقدار PCR ئەسۋابى تەۋسىيە قىلغان ئىنكاس سىستېمىسىنى ئىشلىتىپ ، ھەقىقىي ۋاقىت PCR تەجرىبىسىنى قايتا ئىجرا قىلىڭ.

مىقدار قىممىتىنىڭ تەكرارلىنىشى ياخشى ئەمەس

1. قورال چاتاق.
تەكلىپ: ئەسۋابنىڭ ھەر بىر PCR تۆشۈكىدە خاتالىق بولۇشى مۇمكىن ، تېمپېراتۇرا باشقۇرۇش ياكى بايقاش جەريانىدا كۆپىيىش ئىقتىدارى ناچار بولىدۇ.مۇناسىپ قورالنىڭ كۆرسەتمىسى بويىچە تەكشۈرۈڭ.

2. ئەۋرىشكە ساپلىقى ياخشى ئەمەس.
تەۋسىيە: ئەۋرىشكە ئەۋرىشكىسى سىناقنىڭ قايتا كۆپىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ، بۇ قېلىپ ۋە پىرىماتلارنىڭ ساپلىقىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.ئەڭ ياخشىسى قېلىپنى ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئەڭ ياخشى ، باشلانغۇچلار ئەڭ ياخشىسى SDS-PAGE تەرىپىدىن ساپلاشتۇرۇلغان.

3. PCR سىستېمىسىنىڭ تەييارلىق ۋە ساقلاش ۋاقتى بەك ئۇزۇن.
تەكلىپ: تەييارلىق ۋاقتىدىن كېيىنلا PCR تەجرىبىسى ئۈچۈن ھەقىقىي ۋاقىت PCR سىستېمىسىنى ئىشلىتىڭ ، ئۇنى بەك ئۇزۇن قويۇپ قويماڭ.

4. PCR كۈچەيتىش شارائىتى ماس كەلمەيدۇ ، دەسلەپكى تەرتىپ ياكى قويۇقلۇقى مۇۋاپىق ئەمەس.
تەكلىپ: دەسلەپكى تەرتىپنىڭ توغرىلىقىنى جەزملەشتۈرۈڭ ، قەغەزنىڭ بۇزۇلمىغانلىقىئەگەر كۈچەيتىش سىگنالى ياخشى بولمىسا ، قوشۇمچە تېمپېراتۇرىنى تۆۋەنلىتىپ ، دەسلەپكى قويۇقلۇقىنى مۇۋاپىق تەڭشەڭ.

5. PCR سىستېمىسى نامۇۋاپىق ، ياكى سىستېما بەك كىچىك.
تەكلىپ: PCR ئىنكاس سىستېمىسى بەك كىچىك بولۇپ ، بايقاشنىڭ توغرىلىقىنى تۆۋەنلىتىدۇ.ئەڭ ياخشىسى مىقدار PCR ئەسۋابى تەۋسىيە قىلغان ئىنكاس سىستېمىسىنى ئىشلىتىپ ، ھەقىقىي ۋاقىت PCR تەجرىبىسىنى قايتا ئىجرا قىلىڭ.