قوغۇشۇن

ئۇزۇن كودلاشتۇرمايدىغان RNA ، lncRNA كودلاشتۇرمايدىغان RNA بولۇپ ، ئۇزۇنلۇقى 200 يادرودىن ئاشىدۇ ، ئادەتتە 200-100000 nt ئارىلىقىدا.lncRNA گېننىڭ ئىپادىلىنىشىنى يەرلىك ، ترانسكرىپسىيە ۋە ترانسكرىپسىيەدىن كېيىنكى سەۋىيىدە تەڭشەيدۇ ، ھەمدە X خروموسومىنى جىمىقتۇرۇش ، گېننى بېسىش ۋە خرومتىن ئۆزگەرتىش ، ترانسكرىپسىيەنى قوزغىتىش ، ترانسكرىپسىيەگە ئارىلىشىش ، يادرو تىرانسپورتى ، ھۈجەيرە ئايلىنىشىنى تەڭشەش ، ھۈجەيرىلەرنى پەرقلەندۈرۈشنى تەڭشەش ۋە دورا تولۇقلاش ئۈنۈمى (دوزا تۆلەم ئۈنۈمى) ۋە باشقا نۇرغۇن مۇھىم تەڭشەش جەريانىدىكى قىزىق نۇقتىلار بىلەن مۇناسىۋەتلىك.

01  LncRNA نىڭ تىپى ۋە ئالاھىدىلىكى

lncRNA يۇقارقى رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك ، ئۇنىڭ شەكىللىنىش مەنبەسىنىڭ ئوخشىماسلىقىغا ئاساسەن نۇرغۇن تۈرلەرگە ئايرىلىدۇ.تۆۋەندىكى ئالاھىدىلىكلەرگە ئىگە:

1. lncRNAs ئادەتتە ئۇزۇنراق بولىدۇ ، پەرقلەندۈرۈش جەريانىدا ھەرىكەتچان ئىپادىلەش ۋە ئوخشىمىغان چاپلاش ئۇسۇللىرى بار
2. كودلاش گېنىغا سېلىشتۇرغاندا ، lncRNA ئادەتتە ئىپادىلەش دەرىجىسى تۆۋەنرەك بولىدۇ
3. كۆپىنچە lncRNA لار توقۇلمىلارنى پەرقلەندۈرۈش ۋە تەرەققىي قىلدۇرۇش جەريانىدا روشەن ۋاقىتلىق ۋە بوشلۇق ئىپادىلەش ئالاھىدىلىكىگە ئىگە
4. ئۆسمە ۋە باشقا كېسەللىكلەردە ئالاھىدىلىك ئىپادىلىنىدۇ
5. lncRNA نىڭ تارماق ھۈجەيرە ئورنى كۆپ خىل
6. قوغداش تەرتىپى تۆۋەن ، ئەمما ئىقتىدارنىڭ مەلۇم دەرىجىدە قوغداش قاتارلىقلار بار.

02 LncRNA تەتۈر كۆچۈرۈلۈش توغرىسىدا دائىم سورالغان سوئاللار

ھۈجەيرىلەردە lncRNA نىڭ مىقدارى تۆۋەن ، ئۇزۇنلۇقى ۋە يۇقىرى سەۋىيىلىك قۇرۇلمىسى سەۋەبىدىن ، بۇ خىل RNA نىڭ دائىم غول ھالقىسى ياكى چاچ پاسونى قاتارلىق مۇرەككەپ قۇرۇلمىلىرى بار ، RT-qPCR ئاسانلا تەتۈر كۆچۈرۈلمەسلىك ياكى تۆۋەن ئۈنۈمدىكى مەسىلىلەرگە ئاسان ئۇچرايدۇ.

03 LncRNA تەتۈر كۆچۈرۈش ھەل قىلىش چارىسى

مەركىزى قائىدىدە ، RNA ۋىرۇسىنىڭ ئۆزىنىڭ تەتۈر كۆچۈرۈلمىسىنى ئىشلىتىپ RNA نى قېلىپ قىلىپ بىرىكتۈرۈش جەريانى تەتۈر كۆچۈرۈش دەپ ئاتىلىدۇ.RNA ۋىرۇسىنىڭ تەتۈر كۆچۈرۈلمىسىنى ئىشلىتىپ ۋىرۇستا cDNA قېلىپىنى بىرىكتۈرۈش جەريانى تەتۈر كۆچۈرۈش دەپ ئاتىلىدۇ.تەتۈر ترانسكرىپسىيە سىستېمىسىغا كىرگۈزۈلگەن ئاساسلىق ئېلېمېنتلار: RNA قېلىپى ، تەتۈر كۆچۈرۈلگەن نۇسخا ، پىرىس ۋە باشقا زاپچاسلار.

1.RNA قېلىپى

RNA قېلىپىنىڭ تەتۈر ترانسكرىپسىيەگە بولغان تەسىرى ئۇنىڭ قۇرۇلمىسى ، ساپلىقى ۋە مۇكەممەللىكىدە ئىپادىلىنىدۇ.ئېلىنغان RNA نىڭ ساپلىقى ۋە مۇكەممەللىكى قانچە يۇقىرى بولسا ، تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ئۈنۈمى شۇنچە يۇقىرى بولىدۇ ۋە كېيىنكى مىقدار نەتىجىسى شۇنچە توغرا بولىدۇ.ئادەتتە ئىشلىتىلىدىغان RNA ئېلىش رېئاكتورى ئارقىلىق ساپلاشتۇرۇلغان RNA ھەمىشە ئىسپىرت ۋە گانىدىن تۇزىنىڭ قالدۇقلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ، بۇ كۆپىنچە تەتۈر كۆچۈرۈلۈشتە كۈچلۈك تورمۇزلاش رولىغا ئىگە.

2. خاتىرىنى خاتىرىلەش

تەتۈر كۆچۈرۈلۈش پۈتكۈل تەتۈر كۆچۈرۈش سىستېمىسىدا مۇھىم تەسىرگە ئىگە.كۆپىنچە تەجرىبىخانىلاردا ئىشلىتىلىدىغان تەتۈر كۆچۈرۈلۈشكە ماس كېلىدىغان تېمپېراتۇرا ئادەتتە ° C 42 بولىدۇ.ئەمەلىيەتتە ، يۇقىرى دەرىجىدىكى RNA قۇرۇلمىسىنىڭ ئېچىلىشى تېخىمۇ يۇقىرى تېمپېراتۇرىغا موھتاج ، تەتۈر كۆچۈرۈلۈشكە بولغان تەلەپ تېخىمۇ يۇقىرى.

3.Primer

تەتۈر ترانسكرىپسىيە پروگراممىسى گېنغا خاس پىرىسلاش ، ئىختىيارى پىرىس ۋە Oligo dT پىرىسلىغۇچنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.كۆپىنچە lncRNAs دا polyA قۇيرۇقى يوق ، تاسادىپىي پىرىسنى Oligo dT بىلەن ماسلاشتۇرۇش ئىنتايىن مۇھىم.

4. باشقا زاپچاسلار

RNA نىڭ دەرىجىسىنى تۆۋەنلىتىشنىڭ ئاسانلىقىنى كۆزدە تۇتۇپ ، تەتۈر كۆچۈرۈلۈش سىستېمىسىدا زاپچاسلارنىڭ كىرگۈزۈلۈشىنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرگىلى بولىدۇ ، بۇ RNase نىڭ كىرىشىنىڭ ئۈنۈملۈك ئالدىنى ئالالايدۇ ھەمدە تەتۈر كۆچۈرۈلۈشنىڭ ئوڭۇشلۇق ئىلگىرىلىشىگە كاپالەتلىك قىلالايدۇ.

ForegeneRNA قېلىپىغا ئېرىشىدۇ ، qPCR غا تەتۈر كۆچۈرۈلىدۇ

LncRNA تەكشۈرۈشىڭىزنى ئومۇميۈزلۈك قوغدىڭ

Animal Total RNA I.solationKit (gDNA ئېلىۋېتىش ئىستونى بىلەن)

Cell Total RNA I.solationKit (gDNA ئېلىۋېتىش ئىستونى بىلەن)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase بىلەن) (lncRNA دىن بىرىنچى قاتاردىكى cDNA بىرىكتۈرۈشنىڭ دەرىجىدىن تاشقىرى Premix)

ھەقىقىي ۋاقىت PCR EasyTM-SYBR يېشىل I.

Advantages ofRNA ئېلىش:

بۇ يۈرۈشلۈك ئۈچىنچى ئەۋلاد RNA ئېلىش تېخنىكىسىنى ئىشلىتىدۇ ، DNase ئىشلىتىشنىڭ ھاجىتى يوق.

96 ، 24 ، 12 ۋە 6 قۇدۇق تەخسىلىك مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرىلەردىن 11 مىنۇت ، gDNA يوق ، يۇقىرى ساپلىق ، يۇقىرى سۈپەتلىك ئومۇمىي ھۈجەيرە RNA نى يۇقىرى ئۈنۈملۈك ئېلىش.

LncRNA تەتۈر كۆچۈرۈلۈشنىڭ ئەۋزەللىكى:

LncRNA ئۈچۈن ئالاھىدە ياسالغان تەتۈر كۆچۈرۈش سىستېمىسى گېن گۇرۇپپىسىنىڭ DNA بۇلغىنىشىنى تېزدىن يوقىتىدۇ.

تەتۈر ترانسكرىپسىيە سىستېمىسىنىڭ ئىسسىقلىق مۇقىملىقى يۇقىرى ، يەنىلا 50 سېلسىيە گرادۇسلۇق تەتۈر كۆچۈرۈش ئىقتىدارى بار.

يۇقىرى GC مەزمۇنى ۋە مۇرەككەپ ئىككىلەمچى قۇرۇلمىسى بار قېلىپلارنى يۇقىرى ئۈنۈم بىلەن قايتۇرغىلى بولىدۇ.

ئارتۇقچىلىقىof qPCR:

قىزىق باشلىنىش Foregene Taq Polymerase نىڭ كۈچەيتكۈچ ئۈنۈمى تېخىمۇ يۇقىرى ، كۈچەيتكۈچ سەزگۈرلۈكى ۋە كۈچەيتىشچانلىقى يۇقىرى

ئەلالاشتۇرۇلغان Real PCR Easy Mix SYBR Green I نى بايقاش سەزگۈرلۈكىگە ئىگە قىلىدۇ ، ئۇنىڭ فلۇئورېسسېنسىيە كۈچلۈكلىكى ئوخشاش تۈردىكى مەھسۇلاتلارنىڭكىدىن 3-5 ھەسسە يۇقىرى بولۇپ ، ئوخشىمىغان تىپتىكى فلۇئورېسسېنسىيە مىقدار تەجرىبىسىنىڭ ئېھتىياجىنى قاندۇرالايدۇ.