COVID-19 ئېغىر دەرىجىدىكى جىددىي خاراكتېرلىك نەپەس يولى ئۇنىۋېرسال كېسەللىكى كورونا ۋىرۇسى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان يۇقۇملۇق كېسەللىك بولۇپ ، ئادەم يۇقۇملانغاندا ، ئەڭ كۆپ كۆرۈلىدىغان كېسەللىك ئالامەتلىرى قىزىش ، يۆتەل ۋە نەپەس قىيىنلىشىشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.

سىناققا ئىشلىتىلىدىغان ئەۋرىشكىلەرنى بۇرۇن يۇتقۇنچاق يەللىكى ياكى بوغماق ئۈچەي يەللىكى ئارقىلىق يىغىشقا بولىدۇ.

PCR دېگەن نېمە؟

تاجىسىمان ۋىرۇسنى تەكشۈرۈشنىڭ ئۆلچەملىك ئۇسۇلى پولىمېرازا زەنجىرسىمان ئىنكاسى ، PCR.بۇ مولېكۇلا بىئولوگىيىسىدە كەڭ قوللىنىلىدىغان ئۇسۇل.ئۇ ناھايىتى تېزلا مىليونلىغان مىلياردلىغان ئالاھىدە DNA پارچىلىرىنى كۆچۈرەلەيدۇ.

يېڭى تاجىسىمان ۋىرۇستا ناھايىتى ئۇزۇن تاق تاق RNA گېنى بار.PCR ئارقىلىق بۇ ۋىرۇسلارنى بايقاش ئۈچۈن ، RNA مولېكۇلالىرى چوقۇم تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ئارقىلىق تولۇقلايدىغان DNA تەرتىپىگە ئايلىنىشى كېرەك ، ئاندىن يېڭى بىرىكتۈرۈلگەن DNA ئۆلچەملىك PCR تەرتىپلىرى ئارقىلىق كۈچەيتىلىدۇ ، بۇ ئادەتتە RT-PCR دەپ ئاتىلىدۇ.

RT-PCR جەريان

RNA ئېلىش

بۇ ئۇسۇلنى ئىجرا قىلىش ئۈچۈن ، ۋىرۇسلۇق RNA نى چىقىرىش كېرەك.قۇلايلىق ، تېز ۋە ئۈنۈملۈك ئايرىش ئۈچۈن ھەر خىل RNA تازىلاش ئۈسكۈنىلىرىنى ئىشلىتىشكە بولىدۇ.

سودا زاپچاسلىرى ئارقىلىق ۋىرۇسلۇق RNA نى چىقىرىش ئۈچۈن ، ئالدى بىلەن ئەۋرىشكىنى مىكرو ئېلېمېنتلىق تۇرۇبىغا قوشۇڭ ، ئاندىن ئۇنى لىز بۇففېر بىلەن ئارىلاشتۇرۇڭ.بۇففېرنىڭ قىممىتى يۇقىرى بولۇپ ، ئادەتتە فېنول ۋە گانىدىن ئىزوتىئوكياناتتىن تەركىب تاپىدۇ.ئۇنىڭدىن باشقا ، RNase چەكلىگۈچ ئادەتتە لىز بۇففېردا بار بولۇپ ، مۇكەممەل ۋىرۇسلۇق RNA نىڭ ئايرىلىشىغا كاپالەتلىك قىلىدۇ.

لىز بۇففېرنى قوشقاندىن كېيىن ، تومۇر ئارقىلىق ئارىلاش تۇرۇبىنى قاينىتىپ ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا يوشۇرۇن قىلىڭ.ئاندىن ۋىرۇس لىز بۇففېر تەمىنلىگەن يۇقىرى دەرىجىدىكى تۆۋەنلەش شارائىتىدا لايلىنىدۇ.

ئەۋرىشكە لايلانغاندىن كېيىن ، مەركەزلەشتۈرۈش نەيچىسى تازىلاش تەرتىپىگە ئىشلىتىلىدۇ.ئەۋرىشكە مەركەزدىن قاچۇرۇش تۇرۇبىسىغا قاچىلانغاندىن كېيىن مەركەزلەشتۈرۈلگەن.

بۇ جەريان پۇختا باسقۇچ ئېلىش ئۇسۇلى بولۇپ ، تۇراقلىق باسقۇچ سىلىتسىي گېلى ماترىسسادىن تەركىب تاپىدۇ.

ئەڭ ياخشى تۇز ۋە pH شارائىتىدا ، RNA مولېكۇلاسى سىلىتسىي پەردىسىگە باغلىنىدۇ.

شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ، ئاقسىل ۋە باشقا بۇلغانمىلار چىقىرىۋېتىلىدۇ.

مەركەزدىن قاچقاندىن كېيىن ، مەركەزدىن قاچۇرۇش تۇرۇبىسىنى پاكىز يىغىش تۇرۇبىسىغا سېلىڭ ، سۈزگۈچنى تاشلاڭ ، ئاندىن كىرئالغۇنى قوشۇڭ.

كىرئالغۇنى قايتا مەركەزگە قويۇپ ، يۇيۇش سۇيۇقلۇقىنى پەردىدىن زورلاڭ.بۇنىڭ بىلەن پەردە ئىچىدىكى بارلىق بۇلغانمىلار چىقىرىۋېتىلىدۇ ، پەقەت RNA سىلىتسىي گېلىغا باغلىنىدۇ.

ئەۋرىشكە يۇيۇلغاندىن كېيىن ، نەيچىنى پاكىز مىكرو ئېلېمېنتلىق تۇرۇبىغا سېلىڭ ھەمدە يوقىتىش بۇففېرنى قوشۇڭ.

ئاندىن ئۇ مەركەزلەشتۈرۈلۈپ ، بۇففېرنى پەردىدىن زورلايدۇ.يوقىتىش بۇففېر ئايلانما ئىستوندىكى ۋىرۇسلۇق RNA نى چىقىرىپ تاشلاپ ، ئاقسىل ، چەكلىگۈچ ۋە باشقا بۇلغىمىلاردىن خالىي ساپلاشتۇرۇلغان RNA غا ئېرىشىدۇ.

STEP 2

ئارىلاشما مەركەز

ۋىرۇسلۇق RNA نى چىقىرىۋەتكەندىن كېيىن ، كېيىنكى قەدەمدە PCR كېڭەيتىش ئۈچۈن ئىنكاس ئارىلاشمىسىنى تەييارلاش.بۇ باسقۇچتا ، مەركەزلىشىش ئىشلىتىلىدۇ.بۇ مەركەزلىك ھەل قىلىش چارىسى ئالدىنئالا قويۇقلاشتۇرۇلغان ھەل قىلىش چارىسى بولۇپ ، ئۇ دەسلەپكى قەدەمدە ، تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ، يادرودىن ، ئالدى قەۋەتتىن ، تەتۈر يۆنىلىشتە ، TaqMan تەكشۈرۈش ئەسۋابى ۋە DNA پولىمېراسىدىن تەركىب تاپقان.

ئاخىرىدا ، بۇ ئىنكاس ئارىلاشمىسىنى تاماملاش ئۈچۈن RNA قېلىپى قوشۇلدى.نەيچىلەر تومۇر سوقۇشى بىلەن ئارىلاشتۇرۇلىدۇ ، ئاندىن رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى PCR تەخسىگە قاچىلانغان.PCR تاختىسىدا ئادەتتە 96 قۇدۇق بار بولۇپ ، بىرلا ۋاقىتتا كۆپ ئەۋرىشكىنى تەھلىل قىلالايدۇ.

STEP 3

PCR كېڭەيتىش

ئۇنىڭدىن كېيىن ، تەخسىنى PCR ماشىنىسىغا قويۇڭ ، ئۇ ئاساسەن ئىسسىقلىق ۋېلىسىپىت.

ھەقىقىي ۋاقىتتىكى RT-PCR RdrRP گېنى ، E گېنى ۋە N گېنىدىكى نىشان تەرتىپىنى كېڭەيتىش ئارقىلىق 2019-يىلدىكى رومان تاجىسىمان ۋىرۇسنى بايقاشقا ئىشلىتىلىدۇ.نىشانلىق گېننى تاللاش دەسلەپكى ۋە تەكشۈرۈش تەرتىپىگە باغلىق.

RT-PCR نىڭ بىرىنچى قەدىمى تەتۈر ترانسكرىپسىيە.تولۇقلىما DNA نىڭ بىرىنچى سېپى بىرىكتۈرۈلگەن بولۇپ ، PCR تەتۈر يۆنىلىشلىك قوزغاتقۇچ تەرىپىدىن قوزغىتىلغان ، ئۇ ۋىرۇس RNA گېنىنىڭ تولۇقلاش قىسمىغا تۇتىشىدۇ.ئاندىن تەتۈر كۆچۈرۈلمە قەغەزنىڭ 3′end گە DNA يادروسى قوشۇپ ، ۋىرۇسلۇق RNA بىلەن DNA تولۇقلاش رولىنى ئوينايدۇ.بۇ باسقۇچنىڭ تېمپېراتۇرىسى ۋە داۋاملىشىش ۋاقتى پىرىمېر ، نىشان RNA ۋە تەتۈر ترانسكرىپسىيەگە باغلىق.

كېيىنكى قەدەمدە ، دەسلەپكى قەدەمدە ئايرىش باسقۇچى قوللىنىلىدۇ ، نەتىجىدە RNA-DNA ئارىلاش ماتورلۇقنىڭ ئايلىنىشى كېلىپ چىقىدۇ.بۇ باسقۇچ DNA پولىمېراسىنى قوزغىتىش ئۈچۈن زۆرۈر.شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ، تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ئاكتىپلانمايدۇ.

PCR بىر يۈرۈش ئىسسىقلىق دەۋرىيلىكىدىن تەركىب تاپقان.ھەر بىر دەۋرىيلىك ئايرىش ، ئۇلاش ۋە كېڭەيتىش باسقۇچلىرىدىن تەركىب تاپىدۇ.

ئايرىش باسقۇچى رېئاكسىيە ئۆيىنى 95 سېلسىيە گرادۇسقىچە قىزىتىش ۋە ئۇنى قوش لىنىيىلىك DNA قېلىپىنى ئايرىشقا ئىشلىتىشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.

كېيىنكى قەدەمدە ، رېئاكسىيە تېمپېراتۇرىسى 58 سېلسىيە گرادۇسقا تۆۋەنلەيدۇ ، بۇنىڭ بىلەن ئالدىدىكى پىرىماتورنىڭ يەككە سىزىقلىق DNA قېلىپىنى تولۇقلايدۇ.تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى بىۋاسىتە قەغەزنىڭ ئۇزۇنلۇقى ۋە تەركىبىگە باغلىق.

كېڭەيتىش باسقۇچىدا ، DNA پولىمېراسى DNA قېلىپىنى تولۇقلايدىغان يېڭى DNA يولىنى بىرىكتۈردى.رېئاكسىيە ئارىلاشمىسىدىن 5′to 3′ يۆنىلىشتىكى قېلىپقا ھەقسىز يادرو تولۇقلاش ئارقىلىق.بۇ باسقۇچنىڭ تېمپېراتۇرىسى ئىشلىتىلگەن DNA پولىمېراسىغا باغلىق.

بىرىنچى دەۋرىيلىكتىن كېيىن ، قوش يۆنىلىشلىك DNA نىشانىغا ئېرىشىدۇ.

ئاندىن ئىككىنچى دەۋرىگە كىرىڭ.قوش يۆنىلىشلىك DNA ئىككى خىل يەككە DNA مولېكۇلا ھاسىل قىلىدۇ.

كېيىنكى قەدەمدە ، رېئاكسىيە تېمپېراتۇرىسى تۆۋەنلەيدۇ ، پىرىسلار ھەر بىر تاق DNA ئەۋرىشكىسىگە چاپلىنىدۇ ، تاق ئادەم تەكشۈرۈش ئەسۋابى نىشان DNA نىڭ تولۇقلاش قىسمىغا باغلىنىدۇ.

TaqMan تەكشۈرۈش ئەسۋابى ئولىگونۇكلېئوتىد تەكشۈرۈشىنىڭ 5′end بىلەن تۇتاشتۇرۇلغان فتوروفوردىن تەركىب تاپقان.ۋېلىسىپىت مىنگۈچىنىڭ نۇر مەنبەسىدىن ھاياجانلانغاندا ، فتوروفور فلۇئورېسسېنسىيە تارقىتىدۇ.ئۇنىڭدىن باشقا ، تەكشۈرۈش ئەسۋابى 3′end دىكى ئۆڭكۈردىن تۈزۈلگەن.مۇخبىر گېنىنىڭ ئۆڭكۈرگە يېقىن بولۇشى فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ بايقىلىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.

كېڭەيتىش باسقۇچىدا ، DNA پولىمېراسى يېڭى بىر بەلۋاغنى بىرىكتۈردى.پولىمېرازا TaqMan تەكشۈرۈش ئەسۋابىغا يېتىپ بارغاندا ، ئۇنىڭ ئىچكى مەنبەلىك 5 ′ يادرو پائالىيىتى تەكشۈرۈشنى تازىلاپ ، بوياقنى ئۆڭكۈردىن ئايرىيدۇ.

PCR نىڭ ھەر بىر دەۋرىيلىكى بىلەن تېخىمۇ كۆپ بوياق مولېكۇلا قويۇپ بېرىلىپ ، بىرىكتۈرۈلگەن ئامپلون سانىغا ماس ھالدا فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسى ئاشىدۇ.

بۇ ئۇسۇل ئەۋرىشكىدە بېرىلگەن تەرتىپنىڭ سانىنى مۆلچەرلەشكە يول قويىدۇ.ھەر بىر دەۋرىيلىكتە قوش سىزىقلىق DNA پارچىلىرى بىر ھەسسە قاتلىنىدۇ.شۇڭلاشقا PCR ئىنتايىن كىچىك ئەۋرىشكىلەرنى تەھلىل قىلىشقا ئىشلىتىلىدۇ.

فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالىنى ئۆلچەش ئۈچۈن ، تۇڭگېن گالوگېن چىرىغى ، ھاياجانلىنىش سۈزگۈچ ، نۇر قايتۇرغۇچ ، لىنزا ، بۇلغىما سۈزگۈچ ۋە توك قاچىلاش ئۈسكۈنىسى ئىشلىتىلگەن CCD كامېرا.

STEP 4 Detect

فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالىنى ئۆلچەش ئۈچۈن ، تۇڭگېن گالوگېن چىرىغى ، ھاياجانلىنىش سۈزگۈچ ، نۇر قايتۇرغۇچ ، لىنزا ، بۇلغىما سۈزگۈچ ۋە توك قاچىلاش ئۈسكۈنىسى ئىشلىتىلگەن CCD كامېرا.

چىراغدىن سۈزۈلگەن نۇر نۇر قايتۇرغۇچ ئارقىلىق ئەكىس ئەتتۈرۈلۈپ ، قويۇق لىنزادىن ئۆتىدۇ ۋە ھەر بىر تۆشۈكنىڭ مەركىزىگە مەركەزلىشىدۇ.ئاندىن تۆشۈكتىن قويۇپ بېرىلگەن فلۇئورېسسېنسىيە ئەينەكتىن ئەكىس ئەتتۈرۈلۈپ ، بۇلغىما سۈزگۈچتىن ئۆتىدۇ ۋە CCD كامېراسى ئارقىلىق بايقىلىدۇ.ھەر بىر PCR دەۋرىدە ، ئۆزلۈكىدىن ھاياجانلانغان فتوروفور نۇرنى CCD ئارقىلىق بايقىغىلى بولىدۇ.

ئۇ تۇتۇلغان نۇرنى رەقەملىك سانلىق مەلۇماتقا ئايلاندۇرىدۇ.بۇ ئۇسۇل ھەقىقىي PCR دەپ ئاتىلىدۇ ، ئۇ PCR ئىنكاسىنىڭ ئىلگىرىلەش ئەھۋالىنى دەل ۋاقتىدا نازارەت قىلالايدۇ.