ئومۇمىي چۈشەنچە
گېنى يۆتكەلگەن ئۆسۈملۈكلەرنى تېز پەرقلەندۈرۈش
تېكىست / توڭ يۈچېڭ
تەجرىبە مەشغۇلاتى / خەن يىڭ
تەھرىر / ۋېن يۆجۈن
سۆزلەر / 1600 +
تەۋسىيە قىلىنغان ئوقۇش ۋاقتى / 8-10 مىنۇت
گېنى يۆتكەلگەن ئۆسۈملۈكلەرنى تېز پەرقلەندۈرۈش
تەجرىبىخانىغا يېڭى كەلگەن بولۇش سۈپىتى بىلەن ، ئايلىنىش نىسبىتى تۆۋەن بولغان بىر تۈركۈم ئۆسۈملۈكلەردىن ئاكتىپ ئۆسۈملۈكلەرنى تەكشۈرۈش ياخشى ئىش ئەمەس.ئالدى بىلەن ، چوقۇم نۇرغۇن ئەۋرىشكەلەردىن DNA چوقۇم بىر-بىرلەپ چىقىرىلىشى كېرەك ، ئاندىن چەتئەل گېنى PCR تەرىپىدىن بايقىلىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، بۇ نەتىجىلەر ئاندا-ساندا بىر نەچچە تۈر بىلەن قۇرۇق ۋە بەلۋاغ بولىدۇ ، ئەمما يوقاپ كەتكەن بايقاش ياكى يالغان بايقاشنىڭ بار-يوقلۇقىنى ئېنىقلىغىلى بولمايدۇ..بۇنداق تەجرىبە جەريانى ۋە نەتىجىسىگە يۈزلىنىش تولىمۇ چارىسىزمۇ؟ئەنسىرىمەڭ ، بۇرادەر سىزگە گېنى يۆتكەلگەن ئاكتىپ ئۆسۈملۈكلەرنى قانداق قىلىپ ئاسان ۋە توغرا تەكشۈرۈشنى ئۆگىتىدۇ.
Step 1: لايىھىلەش بايقاش پىرىسلىرى
سىناق قىلىنىدىغان ئەۋرىشكە بويىچە بايقىلىدىغان ئىچكى گېن ۋە تاشقى گېننى ئېنىقلاپ ، دەسلەپكى لايىھە ئۈچۈن گېندىكى 100-500bp لىق ۋەكىللىك تەرتىپنى تاللاڭ.ياخشى پىرىسلاشلار تەكشۈرۈش نەتىجىسىنىڭ توغرىلىقىغا كاپالەتلىك قىلىپ ، بايقاش ۋاقتىنى قىسقارتالايدۇ (دائىم ئىشلىتىلىدىغان تەكشۈرۈش ئەسۋابىنىڭ قوشۇمچە ماتېرىيالىغا قاراڭ).
ئەسكەرتىش:
يېڭىدىن لايىھىلەنگەن پىرىمېرلار كەڭ كۆلەمدە تەكشۈرۈش ئېلىپ بېرىشتىن ئىلگىرى ئىنكاس شارائىتىنى ئەلالاشتۇرۇپ ، بايقاشنىڭ توغرىلىقى ، ئېنىقلىقى ۋە بايقاش چەكلىمىسىنى دەلىللىشى كېرەك.
ئىككىنچى قەدەم:تەجرىبە كېلىشىمنامىسىنى تۈزۈڭ
ئاكتىپ كونترول: نىشان پارچىسىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ساپلاشتۇرۇلغان DNA نى قېلىپ قىلىپ PCR ئىنكاس سىستېمىسى ۋە شارائىتىنىڭ نورمال ياكى ئەمەسلىكىنى ئېنىقلاڭ.
سەلبىي / قۇرۇق كونترول: DNA قېلىپىنى ياكى ddH نى ئىشلىتىڭ2O PCR سىستېمىسىدا بۇلغىنىش مەنبەسىنىڭ بار-يوقلۇقىنى بايقاش ئۈچۈن نىشان بۆلەكنى قېلىپ قىلىپ ئۆز ئىچىگە ئالمايدۇ.
ئىچكى پايدىلىنىش كونتروللۇقى: ئەۋرىشكىنىڭ ئىچكى مەنبەلىك گېننىڭ دەسلەپكى / تەكشۈرۈش بىرىكمىسىنى ئىشلىتىپ سىناق قىلىپ ، قېلىپنىڭ PCR تەرىپىدىن بايقىغىلى بولىدىغان-بولمايدىغانلىقىنى باھالايمىز.
ئەسكەرتىش:
ھەر بىر سىناقتا ئاكتىپ ، مەنپىي / قۇرۇق كونترول ۋە ئىچكى كونترول كونتروللىرى بېكىتىلىپ ، تەجرىبە نەتىجىسىنىڭ توغرىلىقىغا باھا بېرىش كېرەك.
Step3: تەجرىبە تەييارلىقى
ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ، ھەل قىلىش چارىسىنىڭ تەكشى ئارىلاشتۇرۇلغان ياكى قىلىنمىغانلىقىغا دىققەت قىلىڭ.ئەگەر ھۆل-يېغىن بايقالسا ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن كۆرسەتمىگە ئاساسەن ئېرىتىش ۋە ئارىلاشتۇرۇش كېرەك.2 × PCR ئارىلاشتۇرۇشنى ئىشلىتىشتىن بۇرۇن تۇرۇبا يولى ۋە قايتا-قايتا ئارىلاشتۇرۇپ ، ئىئون تارقىلىشىنىڭ تەكشى بولماسلىقىدىن ساقلىنىش كېرەك.
ئەسكەرتىش:
كۆرسەتمىلەرنى چىقىرىپ ئەستايىدىل ئوقۇپ چىقىڭ ، ھەمدە سىناقتىن ئىلگىرى كۆرسەتمىگە ئاساسەن قاتتىق تەييارلىق قىلىڭ.
4-قەدەم: PCR ئىنكاس سىستېمىسىنى تەييارلاڭ
تەجرىبە كېلىشىمنامىسىگە ئاساسەن ، پىرىسنى ئارىلاشتۇرۇڭ ، H.2O, 2 × PCR ئارىلاشتۇرۇش ، مەركەزدىن قاچۇرۇش ۋە ھەر بىر رېئاكسىيە تۇرۇبىسىغا تارقىتىش.
ئەسكەرتىش:
كەڭ كۆلەمدە ياكى ئۇزۇن مۇددەتلىك سىناقتا ، UNG ئېنزىم بار PCR ئىنكاس سىستېمىسىنى ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ ، بۇ PCR مەھسۇلاتلىرى كەلتۈرۈپ چىقارغان ئايروسولنىڭ بۇلغىنىشىدىن ئۈنۈملۈك ساقلىنالايدۇ.
5-قەدەم: ئىنكاس قېلىپىنى قوشۇڭ
بىۋاسىتە PCR تېخنىكىسىنى ئىشلىتىپ زېرىكىشلىك يادرو كىسلاتاسىنى تازىلاشنىڭ ھاجىتى يوق.ئەۋرىشكە قېلىپىنى 10 مىنۇت ئىچىدە تەييارلاپ ، مۇناسىپ PCR ئىنكاس سىستېمىسىغا قوشقىلى بولىدۇ.
ئەسكەرتىش:
Lysis ئۇسۇلىنىڭ بايقاش ئۈنۈمى تېخىمۇ ياخشى بولۇپ ، ئېرىشكەن مەھسۇلاتنى كۆپ خىل بايقاش رېئاكسىيەسىگە ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
5.1: بىۋاسىتە PCR
قوللانمىدىكى رەسىمنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىگە ئاساسەن ، دىئامېتىرى 2-3 مىللىمېتىر كېلىدىغان يوپۇرماق توقۇلمىلىرىنى كېسىپ PCR ئىنكاس سىستېمىسىغا قويۇڭ.
ئەسكەرتىش: يوپۇرماق پارچىلىرىنىڭ PCR رېئاكسىيە ئېرىتمىسىگە پۈتۈنلەي چۆكۈپ كەتكەنلىكىگە كاپالەتلىك قىلىڭ ، ئارتۇق يوپۇرماق توقۇلمىلىرىنى قوشماڭ.
5.2: يوپۇرماق لىمزىسى ئۇسۇلى
دىئامېتىرى 5-7 مىللىمېتىر كېلىدىغان يوپۇرماق توقۇلمىلىرىنى كېسىپ ، مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىگە قويۇڭ.ئەگەر پىشقان يوپۇرماقنى تاللىسىڭىز ، يوپۇرماقنىڭ ئاساسلىق تومۇرى توقۇلمىلىرىنى ئىشلىتىشتىن ساقلىنىڭ.Pipette 50ul Buffer P1 لىماتنى مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىگە لەيلەپ ، لىماتنىڭ يوپۇرماق توقۇلمىلىرىنى پۈتۈنلەي چۆمدۈرۈشىگە ، ئىسسىقلىق ۋېلىسىپىت مىنىش ياكى مېتال مۇنچىغا سېلىشىغا ، 95 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېمپېراتۇرىدا 5-10 مىنۇت تۇرغۇزۇشىغا كاپالەتلىك قىلىدۇ.
50ul Buffer P2 نېيتراللاشتۇرۇش ئېرىتمىسىنى قوشۇپ ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ.ھاسىل بولغان لىزاتنى قېلىپ قىلىپ PCR ئىنكاس سىستېمىسىغا قوشقىلى بولىدۇ.
ئەسكەرتىش: قېلىپنىڭ مىقدارى PCR سىستېمىسىنىڭ% 5-10 ئارىلىقىدا بولۇشى ،% 20 تىن ئېشىپ كەتمەسلىكى كېرەك (مەسىلەن ، 20 مىللىمېتىرلىق PCR سىستېمىسىدا 1-2 مىللىمېتىر لىك لىمفا ئۇلىغۇچ قوشۇڭ ، 4 مىللىمېتىردىن ئېشىپ كەتمەسلىكى كېرەك).
6-قەدەم: PCR ئىنكاسى
PCR رېئاكسىيە تۇرۇبىسىنى مەركەزلەشتۈرگەندىن كېيىن ، ئۇنى PCR قورالىغا قويۇڭ.
ئەسكەرتىش:
رېئاكسىيەدە ساپلاشتۇرۇلمىغان قېلىپ ئىشلىتىلىدۇ ، شۇڭا كۈچەيتىلگەن دەۋرىيلىك سانى ساپ DNA قېلىپىنى ئىشلەتكەنگە قارىغاندا 5-10 ھەسسە كۆپ بولىدۇ.
7-قەدەم: ئېلېكتروفورېزنى بايقاش ۋە نەتىجىنى ئانالىز قىلىش
M: 100bp DNA شوتىسى
1 \ 4: ساپلاشتۇرۇلغان DNA ئۇسۇلى
2 \ 5: بىۋاسىتە PCR ئۇسۇلى
3 \ 6: ئوچۇق كونترول
سۈپەت كونترول:
سىناقتا بېكىتىلگەن ھەر خىل كونتروللارنىڭ سىناق نەتىجىسى تۆۋەندىكى شەرتلەرگە ماس كېلىشى كېرەك.بولمىسا ، مەسىلىنىڭ سەۋەبىنى تەھلىل قىلىش ، مەسىلە تۈگىتىلگەندىن كېيىن قايتا سىناق قىلىش كېرەك.
جەدۋەل 1. ھەر خىل كونترول گۇرۇپپىلىرىنىڭ نورمال سىناق نەتىجىسى
* پلازما مۇسبەت كونترول سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەندە ، ئىچكى گېن تەكشۈرۈش نەتىجىسى مەنپىي بولىدۇ
نەتىجىدە ھۆكۈم:
جاۋاب: ئەۋرىشكىنىڭ ئىچكى مەنبەلىك گېنىنىڭ سىناق نەتىجىسى مەنپىي بولۇپ ، ئادەتتىكى PCR بايقاشقا ماس كېلىدىغان DNA نى ئەۋرىشكەدىن چىقارغىلى بولمايدىغانلىقىنى ياكى ئېلىنغان DNA نىڭ PCR رېئاكسىيە چەكلىگۈچى بارلىقىنى ، DNA نى قايتا چىقىرىش كېرەكلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
B. ئەۋرىشكىنىڭ ئىچكى مەنبەلىك گېنىنىڭ سىناق نەتىجىسى مۇسبەت ، تاشقى گېننىڭ سىناق نەتىجىسى مەنپىي بولىدۇ ، بۇ ئادەتتىكى PCR بايقاشقا ماس كېلىدىغان DNA نىڭ ئەۋرىشكىدىن ئېلىنغانلىقىنى ، ئەۋرىشكە XXX گېنىنىڭ بايقالمىغانلىقىغا ھۆكۈم قىلىشقا بولىدۇ.
C. ئەۋرىشكىنىڭ ئىچكى مەنبەلىك گېنىنىڭ سىناق نەتىجىسى مۇسبەت ، تاشقى گېننىڭ سىناق نەتىجىسى مۇسبەت بولۇپ ، ئەۋرىشكەدىن ئادەتتىكى PCR بايقاشقا ماس كېلىدىغان DNA نىڭ ئېلىنغانلىقى ، ئەۋرىشكە DNA نىڭ XXX گېنى بارلىقى كۆرسىتىلدى.جەزملەشتۈرۈش تەجرىبىسى يەنىمۇ ئىلگىرىلىگەن ھالدا ئېلىپ بېرىلسا بولىدۇ.
8-قەدەم: لايىھىلەش پراكتىكىسى
سىناقتىن كېيىن ،% 2 ناترىي گىئوخلورىت ئېرىتمىسى ۋە% 70 ئېتانول ئېرىتمىسى ئىشلىتىپ ، تەجرىبە رايونىنى سۈرتۈپ ، مۇھىتنىڭ بۇلغىنىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.
قوشۇمچە
2-جەدۋەل گېن ئۆزگەرتىلگەن ئۆسۈملۈكلەرنى PCR بايقاشتا كۆپ ئىشلىتىلىدىغان پىرىمېرلار
پايدىلانما ھۆججەت:
SN / T 1202-2010 ، يېمەكلىكتىكى گېن ئۆزگەرتىلگەن ئۆسۈملۈك تەركىبلىرىنىڭ سۈپەتلىك PCR بايقاش ئۇسۇلى.
يېزا ئىگىلىك مىنىستىرلىكىنىڭ 1485-5-2010-يىللىرى ، گېن ئۆزگەرتىلگەن ئۆسۈملۈكلەرنىڭ تەركىبلىرى ۋە ئۇلارنىڭ مەھسۇلاتلىرى-گۈرۈچ M12 ۋە ئۇنىڭ تۇغۇندى مەھسۇلاتلىرىنى سىناش.
يوللانغان ۋاقتى: Jun-09-2021
