يېقىندا ، مەن ھەيران قالارلىق بىر نەرسىنى بايقىدىم!ئۇنىڭ ئەتراپىدىكى نۇرغۇنلىغان ئىلغار تەجرىبە كەسپىي خادىملىرى ھەتتا بەزى ئاساسىي تەجرىبە بىلىملىرىنىمۇ بىلمەيدۇ.

مەسىلەن ، تۆۋەندىكى سوئاللارغا جاۋاب بېرەلەمسىز؟

OD260 بىلەن A260 نىڭ پەرقى بارمۇ؟ھەر بىرىنىڭ مەنىسى نېمە؟
OD ئوپتىكىلىق زىچلىقنىڭ قىسقارتىلىشى (ئوپتىكىلىق زىچلىق) ، A سۈمۈرۈلۈش (سۈمۈرۈلۈش) نىڭ قىسقارتىلمىسى ، بۇ ئىككى ئۇقۇم ئەمەلىيەتتە ئوخشاش ، «ئوپتىكىلىق زىچلىق» «سۈمۈرۈلۈش» ، ئەمما «ئوپتىكىلىق زىچلىق» كۆپىنچە دۆلەت ئۆلچىمىگە ماس كېلىدۇ ۋە تېخىمۇ قېلىپلاشقان.

ئادەتتە بىز OD قىممىتىنى 260nm قىلىپ ئۆلچەپ ، يادرو كىسلاتاسىنىڭ قويۇقلۇقىنى ھېسابلايمىز ، ئۇنداقتا 1OD نېمىگە ۋەكىللىك قىلىدۇ؟
يادرو كىسلاتاسىنىڭ دولقۇن ئۇزۇنلۇقى 260nm بولغان ئەڭ يۇقىرى سۈمۈرۈلۈش چوققىسىغا ئىگە ، ئۇنىڭدا DNA ۋە RNA ، شۇنداقلا پارچىلىنىپ كەتكەن يادرو كىسلاتاسى پارچىلىرى بار (بۇ ئاچقۇچلۇق نۇقتا).
دولقۇن ئۇزۇنلۇقى 260 nm بولغان OD قىممىتى OD260 دەپ خاتىرىلەندى.ئەگەر ئەۋرىشكە ساپ بولسا ، OD260 قىممىتى يادرو كىسلاتا ئەۋرىشكىسىنىڭ قويۇقلۇقىنى ھېسابلىيالايدۇ.
1 OD260 = 50 mgg / ml dsDNA (قوش لىنىيىلىك DNA)
= 37 μg / ml ssDNA (تاق يۆنىلىشلىك DNA)
= 40 μg / ml RNA
= 30 μg / ml dNTPs (oligonucleotides)
RT-PCR ، Realtime-PCR ۋە QPCR ئوتتۇرىسىدا باغلىنىش ۋە پەرق بارمۇ؟
RT-PCR تەتۈر ترانسكرىپسىيە PCR ئۈچۈن قىسقا
ھەقىقىي ۋاقىت PCR = qPCR ، مىقدارلاشقان ھەقىقىي ۋاقىت PCR ئۈچۈن قىسقا
گەرچە ھەقىقىي ۋاقىت PCR (ھەقىقىي ۋاقىتتىكى فلۇئورېسسېنسىيە مىقدار PCR) ۋە تەتۈر ترانسكرىپسىيە PCR (تەتۈر ترانسكرىپسىيە PCR) ھەر ئىككىلىسى قىسقارتىلغان RT-PCR دەپ قارالسىمۇ.ئەمما خەلقئارالىق ئەھدىنامە: RT-PCR مەخسۇس تەتۈر كۆچۈرۈلگەن PCR نى كۆرسىتىدۇ.

بىئولوگىيەدىكى DNA / RNA نىڭ ئۇزۇنلۇقىنى تەسۋىرلەش ئۈچۈن كۆپ ئىشلىتىلىدىغان nt ، bp ۋە kb قايسىلار؟
nt = nucleotide
bp = ئاساسى جۈپ ئاساسى جۈپ
kb = kilobase

ئەلۋەتتە ، نۇرغۇن كىشىلەر بۇ كىچىك تەپسىلاتلارغا كۆڭۈل بۆلمەيدۇ دەيسىز!ھەممەيلەن بۇنى قىلىدۇ ، ھېچكىم سىزدىن ئۇنىڭ نېمە ئىكەنلىكىنى سورىمايدۇ.بۇنىڭ ھاجەتسىز ئىكەنلىكىنى بىلەمسىز ، شۇنداقمۇ؟

ياق ، ياق ، ياق ، بۇنى بىلىش تولىمۇ زۆرۈر!بۇنىڭ سەۋەبى نېمە؟
چۈنكى سىز ماقالە يازماقچى!بۇرادەر!مەيلى ئوقۇش پۈتتۈرۈشنى مەقسەت قىلامسىز ياكى ئىلمىي تەتقىقات مۇۋەپپەقىيەتلىرىنى قوغلىشىڭ ، چوقۇم ماقالىگە تايىنىشىڭىز كېرەك!

يادرو كىسلاتاسىنى ئېلىش ئەڭ ئاددىي ۋە ئەڭ ئاساسلىق تەجرىبە بولۇشى كېرەك.يادرو كىسلاتاسىنى ئېلىشنىڭ سۈپىتى كېيىنكى سىناقلارنىڭ نەتىجىسىنى بىۋاسىتە بەلگىلەيدۇ.

مەن ئۇنى كۆپ قېتىم ئېيتقان بولساممۇ ، يەنىلا كۆڭۈل بۆلمەيدىغان نۇرغۇن دوستلار بار.بۇ قېتىم مەن ماقالىدىن چېكىنىشنى قارار قىلدىم!

MIQE دەپ ئاتىلىدىغان مىقدارلاشقان ھەقىقىي ۋاقىتتىكى PCR تەجرىبىسىنى ئېلان قىلىشنىڭ ئەڭ تۆۋەن ئۇچۇرى، خەلقئارادا يولغا قويۇلغان بىر يۈرۈش فلۇئورېسسېنسىيە مىقدار تەجرىبە كۆرسەتمىسى بولۇپ ، ئۇ فلۇئورېسسېنسىيە مىقدار PCR تەجرىبىسىنى باھالاش ۋە ماقالە ئېلان قىلىش ئۈچۈن زۆرۈر بولغان تەجرىبە ئۇچۇرلىرىنىڭ ئەڭ تۆۋەن ئۆلچىمىنى ئوتتۇرىغا قويدى.تەجرىبە قىلغۇچى تەمىنلىگەن تەجرىبە شارائىتى ۋە تەھلىل ئۇسۇللىرى ئارقىلىق ، باھالىغۇچىلار تەتقىقاتچىنىڭ تەجرىبە پىلانىنىڭ توغرىلىقىنى تېخىمۇ ياخشى باھالايدۇ.

بۇنىڭدىن كۆرۈۋېلىشقا بولىدۇكى ، يادرو كىسلاتاسى ئېلىش بۆلۈمىدە تۆۋەندىكى بايقاش تۈرلىرى ئوتتۇرىغا قويۇلغان ،

«E» چوقۇم تەمىنلەشكە تېگىشلىك ئۇچۇرلارنى كۆرسىتىدۇ ، «D» زۆرۈر تېپىلغاندا تەمىنلەشكە تېگىشلىك ئۇچۇرلارنى كۆرسىتىدۇ.

بۇ شەكىل ئىنتايىن مۇرەككەپ ، ئەمەلىيەتتە مەن شۇنى دېمەكچىمەنكى ، ھەممە ئادەم ئىشنى باشلىشى كېرەك

ساپلىق (D) ، مەھسۇلات (D) ، پۈتۈنلۈك (E) ۋە ئىزچىللىق (E) بۇ تۆت تەرەپتىكى يادرو كىسلاتاسىنى باھالايدۇ.

تەجرىبە ئادىتىگە ئاساسەن ، ئالدى بىلەن ساپلىق ۋە زېھنىنى باھالاش ئۇسۇللىرىنى سۆزلەڭ.

OD ئۆلچەش تەجرىبە قىلغۇچىلار ئەڭ ياقتۇرىدىغان ۋە ئەڭ ئاسان بايقاش ئۇسۇلى.پرىنسىپقا كەلسەك ، مەن بۇ يەردە تەپسىلىي توختالمايمەن.ھازىر نۇرغۇن تەجرىبىخانىلار ئۇلترا مىكرو سپېكترو فوتومېتىر ئىشلىتىپ ، يادرو كىسلاتا ئەۋرىشكىسىنى بىۋاسىتە مىقدارلاشتۇرۇپ تەھلىل قىلىدۇ.سۈمۈرۈلۈش قىممىتىنى كۆرسىتىش بىلەن بىر ۋاقىتتا ، پروگرامما قويۇقلۇقى (يادرو كىسلاتاسى ، ئاقسىل ۋە فلۇئورېسسېنسىيە بوياق) ۋە مۇناسىۋەتلىك نىسبەتلەرنى بىۋاسىتە بېرىدۇ.OD قىممىتىنى تەھلىل قىلىشقا كەلسەك ، بۇ رەسىمنى ساقلاڭ ، ياخشى بولۇپ قالىسىز.

ئۇنىۋېرسال OD قىممەت ھەل قىلىش تىزىملىكى

قانداقلا بولمىسۇن ، سىز ئۈچۈن ئايرىم چىقىرىشقا تېگىشلىك بىر قانچە ئۆڭكۈر بار.

(نېمىلا دېگەن بىلەن ، مەن چوقۇم ئۇلارنى تېجەپ ، ئۇلارغا ئېھتىياجلىق بولغۇچە ساقلايدىغان ئادەم بولۇشىڭىزنى بىلىمەن!)

ئەسكەرتىش 1 ئۈسكۈنىلەر

OD قىممىتى ئوخشىمىغان ئۈسكۈنىلەرنىڭ تەسىرىگە ئۇچرايدۇ.OD260 مەلۇم دائىرىدە بولسىلا ، OD230 ۋە OD280 نىڭ قىممىتى ئەھمىيەتلىك.مەسىلەن ، ئورتاق Eppendorf D30 نىڭ 260nm دىكى سۈمۈرۈلۈش دائىرىسى 0 ~ 3A ، تېرمونىڭ NanoDrop بىرى 260nm.سۈمۈرۈلۈش دائىرىسى 0.5 ~ 62.5A.

ئەسكەرتىش 2Dilution reagent

OD قىممىتى ئوخشىمىغان رېئاكتورلارنىڭ سۇيۇلۇشىنىڭ تەسىرىگە ئۇچرايدۇ.مەسىلەن ، pH دىكى ساپلاشتۇرۇلغان RNA نى OD260 / 280 ئوقۇش7.5 10mM Trisبۇففېر بولسا 1.9-2.1 ئارىلىقىدانېيترال سۇ ئېرىتمىسىبۇ نىسبەت تېخىمۇ تۆۋەن بولىدۇ ، بەلكىم پەقەت 1.8-2.0 بولۇشى مۇمكىن ، ئەمما بۇ RNA سۈپىتىنىڭ ئوخشىماسلىقىنى بىلدۈرمەيدۇ.

دىققەت 3قالدۇق ماددىلار

قالدۇق ماددىلارنىڭ مەۋجۇت بولۇشى يادرو كىسلاتاسىنىڭ قويۇقلۇقىنى ئۆلچەشنىڭ توغرىلىقىغا تەسىر كۆرسىتىدۇ ، شۇڭا ئىمكانقەدەر يادرو كىسلاتا ئەۋرىشكىسىدىكى ئاقسىل ، فېنول ، پولىساخارىد ۋە پولىفېنول قالدۇقىدىن ساقلىنىش كېرەك.

قانداقلا بولمىسۇن ، ئەمەلىيەتتە ئورگانىك رېئاكتور بىلەن ئېلىش كونا ئۇسۇل.سودا زاپچاسلىرىدا ، سىلىتسىينى ئاساس قىلغان سۈمۈرۈلۈش تۈۋرۈكى ئارقىلىق مەركەزلەشتۈرۈش ئارقىلىق بىرلەشتۈرۈش ، چىقىرىۋېتىش تەس بولغان زەھەرلىك ۋە زىيانلىق ئورگانىك رېئاكتىپلاردىن ساقلىنىش قاتارلىقلار ئارقىلىق ئېلىش ئۈنۈمىگە ئېرىشكىلى بولىدۇ.Foregene نىڭ يادرو كىسلاتاسىنى يىغىش زاپچاسلىرى ، مەشغۇلات جەريانىدا DNase / RNase ۋە زەھەرلىك ئورگانىك رېئاكتورنى ئىشلەتمەيدۇ ، تېز ۋە بىخەتەر, ۋەئۈنۈمياخشى(ئېھتىياتسىزلىقتىن تاقىرباش دېدى ، ئەمما بىلگۈڭىز بارلىقىنى بىلىمەن).

مىسال 1: گېن گۇرۇپپىسىنىڭ DNA ئېلىش ئۈنۈمى ۋە ساپلىقى

Foregene تۇپراق DNA ئايرىمىسى (DE-05511) ھەر خىل مەنبەلەردىكى تۇپراق ئەۋرىشكىسىنى بىر تەرەپ قىلىدۇ ، ئېرىشىلگەن گېن DNA نىڭ مىقدارى ۋە ساپلىقى تۆۋەندىكى جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى:
مىسال 2: توقۇلما RNA ئېلىش ئۈنۈمى ۋە ساپلىقى

ھايۋانلارنىڭ ئومۇمىي RNA ئايرىمىسى (RE-03012) ھەر خىل توقۇلمىلار ئەۋرىشكىسىنى بىر تەرەپ قىلدى ، ئېرىشكەن RNA نىڭ مىقدارى ۋە ساپلىقى تۆۋەندىكى جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى (مائۇس توقۇلمىلىرى ئۈچۈن):
قانداقلا بولمىسۇن ، سىزنى OD قىممىتى بىلەن تاماملاندى دەپ ئويلىماڭ.مەن ئالدىڭىزدا سىز ئۈچۈن سىزغان مۇھىم نۇقتىلارغا كۆڭۈل بۆلەمسىز؟

دىققەت

پارچىلىنىپ كەتكەن يادرو كىسلاتا مولېكۇلىلىرىمۇ سۈمۈرۈلۈشتە ھېسابلىنىدۇ.RNA دا گېن گۇرۇپپىسىدىكى DNA قالدۇقى بار دەپ پەرەز قىلساق ، OD قىممىتىڭىز قارىماققا ناھايىتى يۇقىرىدەك قىلىدۇ ، ئەمما RNA نىڭ ئەمەلىي قويۇقلۇقىنى ئېنىقلىغىلى بولمايدۇ.RNA نىڭ بار-يوقلۇقى ئېنىق ئەمەس ، شۇڭا چېكىنىش بار-يوقلۇقى ئېنىق ئەمەس ، شۇڭا بىز تېخىمۇ توغرا ھۆكۈم چىقىرىش ئۈچۈن يەنىلا ئەتراپلىق باھالاش ئۇسۇلىغا موھتاج ، يەنى MIQE دا تىلغا ئېلىنغان يادرو كىسلاتاسىنىڭ مۇكەممەللىكىنى باھالاش كېرەك.