يېلىمنى ئەسلىگە كەلتۈرۈشنى ياخشىلاشنىڭ ئۇسۇللىرى

1. ئېلېكتروفورېز جەريانىدا ئەۋرىشكە يۈكىنى ئاشۇرۇش.

2. يېڭىدىن تەييارلانغان ئېلېكتروفورېزلىق بۇففېرنى ئىشلىتىڭ.

3. يېلىم كېسىلگەندە ، پەقەت يېلىم بىلەن بەلۋاغنى كېسىشكە تىرىشىڭ ، يېلىم كېسىشنىڭ مىقدارىنى ئازايتىڭ: ئاز ساندىكى مەقسەت پارچىلىرى بىلەن يېلىمغا ئېھتىياجلىق بولماڭ ، بولمىسا ئەسلىگە كېلىش سۈرئىتىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.

4. ئىككى ياكى ئۇنىڭدىن ئارتۇق يېلىم ئېرىتىلگەندىن كېيىن ، ھەجىمى قانچىلىك چوڭ بولۇشىدىن قەتئىينەزەر تۇرۇبا ئىشلىتىپ ، ئوخشاش بىر ئىستونغا يۆتكەڭ.

5. سولغا قوشۇلغان ھەل قىلىش چارىسى ئازراق بولۇشى مۇمكىن ، بۇ DNA نىڭ پەردىگە باغلىنىشىغا تېخىمۇ پايدىلىق ، ئەمما ئادەتتە 750ul دىن ئېشىپ كەتمەيدۇ.

6. گېلىنى ئەسلىگە كەلتۈرۈشنىڭ ئاچقۇچى تۇز قويۇقلۇقى ، كىسلاتالىق (توك) ۋە تۈۋرۈكتىكى ئېرىتمىنىڭ گىدروپوبىكلىقى ئارقىلىق DNA نى تۈۋرۈككە باغلاش.شۇڭلاشقا ، ئەگەر ئېلېكتروفورېزلىق بۇففېرنىڭ pH قىممىتى بەك يۇقىرى بولسا ، سولغا 10ul (pH 5.0 ، 3mol / L NaAC) قوشۇلسا بولىدۇ.پەردىدىكى DNA مولېكۇلاسىنى تېخىمۇ ياخشى توسۇش ئۈچۈن ، يېلىمنى ئېرىتكەندىن كېيىن% 30 ئىزوپروپانولنى سۇيۇقلۇققا ئىسسىقلىق بىلەن قوشقىلى بولىدۇ.

7. ئېلېمېنتنى قوشۇشتىن بۇرۇن ، ئىستوننى ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا بىر نەچچە مىنۇت (تەخمىنەن 10 مىنۇت) قويۇپ ، ئېتانولنى تولۇق پارغا ئايلاندۇرۇش كېرەك.

8. ئاخىرىدا ، ئازراق راۋان قوشۇپ ، ئەسلىگە كەلتۈرۈش مىقدارىنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرۈڭ.ئادەتتە ، 30-50 مىللىمېتىرلىق سۇيۇقلۇق يوقىتىش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ (بەك ئاز ئەمەس ، بولمىسا پەردىگە ھۆل بولالمايدۇ ، بۇ يوقىتىشقا پايدىسىز).يوقىتىش تامچىلىرى پەردىنىڭ مەركىزىدە بولۇپ ، پەردىگە باغلانغان DNA نى تولۇق يوقىتىدۇ.

9. سۇيۇقلۇقنى قوشقاندىن كېيىن ، ئۇنى 55 گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىدا 5 مىنۇت تۇرغۇزغىلى ياكى 50 گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىغا 10 مىنۇتتىن ئارتۇق قويغىلى ياكى بىر كېچىدە 4 گرادۇسلۇق پارفىل بىلەن پېچەتلىگىلى ، ئاندىن ئەتىسى ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈچۈن مەركەزلەشتۈرۈپ ، ئۈنۈمى ياخشى بولىدۇ.

10. مەركەزدىن قاچۇرۇلغان ئېلېمېنتنى قايتا سۈمۈرۈلۈش ئىستونىغا ۋە مەركەزدىن قاچۇرۇشنى قوشۇڭ.

PCR مەھسۇلاتلىرىنى ئەسلىگە كەلتۈرۈشنىڭ تەپسىلىي ئۇسۇلى ۋە تەرتىپى

1. ئادەتتىكى كاۋچۇكنى يىغىۋېلىش

ئەگەر يېلىمنى ئەسلىگە كەلتۈرمەكچى بولسىڭىز ، ئەڭ ياخشىسى يۈرۈشلۈك زاپچاسلارنى ئىشلىتىش كېرەك ، بۇ قۇلايلىق ھەم ئەسلىگە كېلىش نىسبىتى سەل يۇقىرى.ئەگەر ئۇنى ھەقىقىي قولدا ئەسلىگە كەلتۈرۈشكە توغرا كەلسە ، يېلىمنى كېسىۋەتكەندىن كېيىن TE ئاۋازىنىڭ 3 ھەسسىسىنى قوشالايسىز.سۇ مۇنچىسىدا ئېرىگەندىن كېيىن ، فېنول ، فېنول / خلوروفورم پاكىز چىقىرىلىپ ، ئېتانول چۆكۈپ كېتىدۇ.بولدى.

2. تۆۋەن ئېرىتىش نۇقتىسى گېلىدىن DNA ئەسلىگە كېلىش

DNA پارچىلىرىنى ساپلاشتۇرۇش گېلىنىڭ مىقدارىغا تەڭ كېلىدىغان TE (10 mmol / l Tris-HCl pH8.0 ، 0.1 mmol / l EDTA) نى قوشۇڭ ، 65 سېلسىيە گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىغا 5 مىنۇت تۇرغۇزۇپ ، گېلىنى پۈتۈنلەي ئېرىتىمىز.

ئۇ ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسىغا ئېلىپ كېلىنگەندىن كېيىن ، ئوخشاش مىقداردىكى فېنول (TE بىلەن تويۇندى ، TE ئۈستۈنكى قەۋەتتە پېچەتلەندى ، فېنولنىڭ تۆۋەنكى قەۋىتى ئېلىۋېتىلدى) قوشۇلدى ، ھەمدە ئارىلاشما يۇمشاق ئارىلاشتۇرۇلدى (ئارىلاشتۇرۇشنىڭ ھاجىتى يوق) ، ھەمدە كەچ سائەت 12000 دە مەركەزلەشتۈرۈلۈپ 3 مىنۇت.1-2 قېتىم تەكرارلاڭ.

خاسىيەتلىك ماددىلارنى ئېلىپ ، 0.1 توم 3mol / L ناترىي ئاتسېتات (pH 5.2) ۋە مۇتلەق ئېتانولنىڭ 2.5 ھەسسىسىنى قوشۇپ ، ئېتانول يېغىشنى ئەمەلگە ئاشۇرۇڭ.ساپلاشتۇرۇلغان DNA نى مۇۋاپىق مىقداردا ئېرىتىپ ، مەزمۇنىنى ئۆلچەڭ ۋە ئىشلىتىشكە تەييارلىق قىلىڭ (ئۇنى نىشانلىق گېن قۇرۇلمىسىنى ئانالىز قىلىش ، تەكشۈرۈش ئەسۋابى تەييارلاش قاتارلىقلارغا ئىشلىتىشكە بولىدۇ).

3. ياخشى كۈچەيتىش ئالاھىدىلىكى بىلەن PCR ئەسلىگە كەلتۈرۈش

ئەگەر PCR كېڭەيتىشنىڭ ئالاھىدىلىكى ياخشى بولسا ، ئۇ پەقەت PCR مەھسۇلاتلىرىنىڭ ئاددىي ساپلاشتۇرۇلۇشى ۋە ئەسلىگە كېلىشى خالاس.PCR مەھسۇلاتىغا 50ug / ml ئاقسىل K ، 37 گرادۇس 1h ، فېنول / خلوروفورم بىلەن بىر قېتىم ، خلوروفورم بىلەن بىر قېتىم چىقىرىپ ، خاسىيەتلىك ماددىنىڭ 0.1 ھەجىمىنى قوشالايسىز.ناترىي كىسلاتاسى 2.5 توم مۇتلەق ئېتانول بىلەن ھۆل-يېغىن ئارقىلىق ئەسلىگە كەلگەن.

مۇناسىۋەتلىك مەھسۇلاتلار:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/