Real Time PCR يەنە مىقدارلاشقان PCR ياكى qPCR دەپمۇ ئاتىلىدۇ ، PCR كېڭەيتىش مەھسۇلاتلىرىنى دەل ۋاقتىدا نازارەت قىلىش ۋە تەھلىل قىلىشنىڭ ئۇسۇلى.
مىقدارلاشقان PCR ئاددىي مەشغۇلات ، تېز ۋە قۇلايلىق ، سەزگۈرلۈك يۇقىرى ، قايتا-قايتا تەكرارلىنىش ۋە بۇلغىنىش نىسبىتى تۆۋەن بولۇشتەك ئەۋزەللىككە ئىگە بولغاچقا ، ئۇ داۋالاش سىنىقى ، دورا ئۈنۈمىنى باھالاش ، گېن ئىپادىلەش تەتقىقاتى ، گېنى يۆتكەش تەتقىقاتى ، گېننى تەكشۈرۈش ، كېسەللىك قوزغاتقۇچنى بايقاش ، ھايۋانات ۋە ئۆسۈملۈكلەرنى بايقاش قاتارلىقلاردا كەڭ قوللىنىلىدۇ.، يېمەكلىك سىنىقى ۋە باشقا ساھەلەر.
شۇڭلاشقا ، مەيلى سىز ھاياتلىق ئىلمى تەتقىقاتى بىلەن شۇغۇللىنىسىز ، ياكى دورا ياساش شىركەتلىرى ، باقمىچىلىق شىركەتلىرى ، يېمەكلىك شىركەتلىرى ، ھەتتا چېگرادىن كىرىش-چىقىش تەكشۈرۈش ۋە كارانتىن ئىدارىسى ، مۇھىتنى نازارەت قىلىش تارماقلىرى ، دوختۇرخانا ۋە باشقا ئورۇنلارنىڭ خىزمەتچىلىرى بولسۇن ، ئازدۇر-كۆپتۇر ئاشكارىلىنىسىز ياكى مىقدارلاشقان PCR نى ئىگىلەش بىلىملىرىنى بىلىشىڭىز كېرەك.

ھەقىقىي ۋاقىت PCR نىڭ پرىنسىپى

ھەقىقىي ۋاقىت PCR بولسا PCR رېئاكسىيە سىستېمىسىغا فتور فېرمېنسىيىلىك ماددىلارنىڭ قوشۇلىدىغان ئۇسۇلى بولۇپ ، PCR رېئاكسىيە جەريانىدىكى فتور فېرمېنسىيىلىك سىگنالنىڭ كۈچلۈكلۈكى مىقدارلاشقان PCR ئەسۋابى ئارقىلىق دەل ۋاقتىدا كۆزىتىلىدۇ ، ئاخىرىدا تەجرىبە سانلىق مەلۇماتلىرى ئانالىز قىلىنىپ بىر تەرەپ قىلىنىدۇ.

【كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقى】PCR نىڭ ھەرىكەتچان جەريانىنى تەسۋىرلەيدىغان ئەگرى سىزىق.PCR نىڭ كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقى ئەمەلىيەتتە ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق ئەمەس ، بەلكى سىگمود ئەگرى سىزىقى.

[كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقىنىڭ سۇپا باسقۇچى]PCR دەۋرىيلىكىنىڭ كۆپىيىشى ، DNA پولىمېراسىنىڭ ئاكتىپسىزلىنىشى ، DNTP ۋە پىرىمېرلارنىڭ خورىشى ۋە مەھسۇلاتنىڭ پىروفوسفات قاتارلىق رېئاكسىيەنىڭ بىرىكتۈرۈلۈشىنىڭ چەكلىنىشىگە ئەگىشىپ ، PCR ھەمىشە تېز كېڭەيمەيدۇ.، ۋە ئاخىرىدا ئېگىزلىككە كىرىدۇ.

[كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقىنىڭ ئۇچقاندەك تەرەققىي قىلىش رايونى]گەرچە تۈزلەڭلىك باسقۇچى زور دەرىجىدە پەرقلەنسىمۇ ، ئەمما كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقىنىڭ ئۇچقاندەك ئۆسۈش رايونىنىڭ مەلۇم رايونىدا ، تەكرارلىنىش ئىنتايىن ياخشى ، بۇ PCR نى مىقدارلاشتۇرۇپ تەھلىل قىلىشتا ئىنتايىن مۇھىم.

[چەك قىممىتى ۋە Ct قىممىتى]بىز فتور فېرمېنسىيىلىك تەكشۈرۈشنىڭ چەك قىممىتىنى كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقنىڭ كۆرسەتكۈچ ئۆسۈش رايونىدىكى مۇۋاپىق ئورۇنغا قويدۇق ، يەنى بوسۇغا قىممىتى (Threshold).بوسۇغا قىممىتى بىلەن كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقىنىڭ كېسىشىش ئېغىزى Ct قىممىتى ، يەنى Ct قىممىتى بوسۇغا قىممىتىگە يەتكەندە دەۋرىيلىك سانى (Threshold دەۋرىيلىكى) نى كۆرسىتىدۇ.

تۆۋەندىكى رەسىمدە بوسۇغا سىزىقى بىلەن كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقى ، بوسۇغا ۋە Ct قىممىتى ئوتتۇرىسىدىكى مۇناسىۋەت ئېنىق كۆرسىتىلدى.

【قانداق مىقدارلاشتۇرۇش كېرەك؟】

ماتېماتىكىلىق نەزەرىيە ئارقىلىق ئىسپاتلاندى ، Ct قىممىتى دەسلەپكى قېلىپلارنىڭ سانىنىڭ لوگارىزىم بىلەن تەتۈر سىزىقلىق مۇناسىۋىتى بار.ھەقىقىي ۋاقىت PCR PCR كۈچەيتىش مەھسۇلاتلىرىنى دەل ۋاقتىدا نازارەت قىلىدۇ ۋە كۆرسەتكۈچ كېڭەيتىش باسقۇچىدا مىقدارلاشتۇرىدۇ.

PCR نىڭ ھەر بىر دەۋرىگە نىسبەتەن ، DNA 2 ھەسسە ئېشىپ ، ئۇزۇن ئۆتمەي ئېگىزلىككە يەتتى.

DNA نىڭ باشلىنىش مىقدارىنى A دەپ پەرەز قىلساق₀ ، n دەۋرىيلىكتىن كېيىن ، DNA مەھسۇلاتنىڭ نەزەرىيىۋى مىقدارىنى مۇنداق ئىپادىلەشكە بولىدۇ:

A _n =A ₀ × 2ⁿ

ئاندىن ، دەسلەپكى DNA مىقدارى A 0 قانچە كۆپ بولسا ، كۈچەيتىلگەن مەھسۇلاتنىڭ مىقدارى بايقاش قىممىتى An غا شۇنچە تېز يېتىدۇ ، An غا يەتكەندە دەۋرىيلىك سانى Ct قىممىتى بولىدۇ.دېمەك ، دەسلەپكى DNA مىقدارى A 0 قانچە كۆپ بولسا ، كۈچىيىش ئەگرى سىزىقى قانچە يۇقىرى بولسا ، ماس ھالدا تەلەپ قىلىنغان دەۋرىيلىك سانىمۇ ئاز بولىدۇ.

بىز مەلۇم قويۇقلۇق دەرىجىسىنىڭ تەدرىجىي كېڭىيىشىنى ئېلىپ بېرىپ ، ئۇنى ھەقىقىي ۋاقىت PCR نىڭ قېلىپى سۈپىتىدە ئىشلىتىمىز ، DNA مىقدارىنى ئاز-ئازدىن باشلاش تەرتىپىدە بىر قاتار كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقى ئوخشاش ئارىلىقتا ئېرىشىدۇ.Ct قىممىتى بىلەن باشلىنىش قېلىپىنىڭ لوگارىزىم ئوتتۇرىسىدىكى تۈز سىزىقلىق مۇناسىۋەتكە ئاساسەن ، a[ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق] قۇرغىلى بولىدۇ.

ئەۋرىشكىنىڭ Ct قىممىتىنى نامەلۇم قويۇقلۇقى بىلەن ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىققا ئالماشتۇرۇش ئارقىلىق ، ئەۋرىشكىنىڭ دەسلەپكى قېلىپ مىقدارى نامەلۇم قويۇقلۇقىغا ئېرىشكىلى بولىدۇ ، بۇ ھەقىقىي ۋاقىت PCR نىڭ مىقدار پرىنسىپى.

ھەقىقىي ۋاقىت PCR نىڭ بايقاش ئۇسۇلى

Real Time PCR رېئاكسىيە سىستېمىسىدىكى فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنى بايقاش ئارقىلىق PCR كۈچەيتمە مەھسۇلاتلىرىنى بايقىيالايدۇ.

فلۇئورېسسېن بوياش نەقىش ئۇسۇلىنىڭ پرىنسىپى】

فلۇئورېسسېنسىيە بوياقلىرىمەسىلەن ، TB Green ® ، PCR سىستېمىسىدىكى قوش لىنىيىلىك DNA ۋە باغلىغاندا فتور فېرمېنسىيىسى بىلەن ئالاھىدە باغلىنالايدۇ.

PCR دەۋرىيلىكىنىڭ ئېشىشىغا ئەگىشىپ ، ئىنكاس سىستېمىسىدىكى فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسى شىددەت بىلەن ئاشتى.فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنى بايقاش ئارقىلىق ، ئىنكاس سىستېمىسىدىكى DNA كۈچەيتكۈچنىڭ مىقدارىنى دەل ۋاقتىدا نازارەت قىلغىلى بولىدۇ ، ئاندىن ئەۋرىشكەدىكى باشلىنىش قېلىپىنى تەتۈر مۆلچەرلىگىلى بولىدۇ.

【فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئۇسۇلىنىڭ پرىنسىپى】

fluorescent probe5 ′ ئۇچىدىكى فلۇئورېسسېنسىيە گۇرۇپپىسى ۋە 3 ′ ئۇچىدىكى ئۆچۈرۈش گۇرۇپپىسى بولغان يادرو كىسلاتاسى تەرتىپى بولۇپ ، قېلىپنى ئالاھىدە باغلىيالايدۇ.تەكشۈرۈش ئەسۋابى مۇكەممەل بولغاندا ، فتوروفور قويۇپ بەرگەن فتور فېرمېنسىيىسى ئۆچۈرۈش گۇرۇپپىسى تەرىپىدىن ئۆچۈرۈلۈپ ، فلۇئورېسسېنسىيە قىلالمايدۇ.تەكشۈرۈش ئەسۋابى پارچىلىنىپ كەتسە ، فلۇئورېسسېنسىيە ماددىسى پارچىلىنىپ فلۇئورېسسېنسىيە تارقىتىدۇ.

PCR رېئاكسىيە ھەل قىلىش چارىسىگە فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئەسۋابى قوشۇلدى.تۇتاشتۇرۇش جەريانىدا ، فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئەسۋابى قېلىپنىڭ كونكرېت ئورنىغا باغلىنىدۇ.ئۇزارتىش جەريانىدا ، PCR فېرمېنتىنىڭ 5 ′ → 3 ′ exonuclease پائالىيىتى قېلىپ بىلەن بىرىكتۈرۈلگەن فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئەسۋابىنى پارچىلىيالايدۇ ، فلۇئورېسسېنسىيە ماددىسى پارچىلىنىپ فلۇئورېسسېنسىيە تارقىتىدۇ.رېئاكسىيە سىستېمىسىدىكى تەكشۈرۈش ئەسۋابىنىڭ فلۇئورېسسېنسىيە كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنى بايقاش ئارقىلىق ، PCR مەھسۇلاتىنىڭ كېڭەيتىش مىقدارىنى نازارەت قىلىش مەقسىتىگە يەتكىلى بولىدۇ.

【فلۇئورېسسېنسىيەنى تەكشۈرۈش ئۇسۇلىنى تاللاش】

ئەگەر ئۇ يۇقىرى گومولوگىيە بىلەن تەرتىپنى پەرقلەندۈرۈش ۋە SNP كىرگۈزۈش ئانالىزى قاتارلىق كۆپ ئىقتىدارلىق PCR بايقاشنى ئىشلىتىشكە ئىشلىتىلسە ، فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئۇسۇلىنى ئالماشتۇرغىلى بولمايدۇ.
باشقا ھەقىقىي ۋاقىت PCR تەجرىبىسىگە نىسبەتەن ، ئاددىي ، ئاسان ۋە ئەرزان باھالىق فلۇئورېسسېنسىيە خېرېرا ئۇسۇلىنى قوللانغىلى بولىدۇ.

probesStrong خاسلىقى ، كۆپ ئىقتىدارلىق PCR ئىقتىدارىغا ئىگە

قىسقا

كۈچەيتىشنىڭ يۇقىرى ئېنىقلىق تەلىپى

multiplex PCR نى ئىجرا قىلغىلى بولمايدۇ ئالاھىدە تەكشۈرۈش ، لايىھىلەش تەننەرخى يۇقىرى.

بەزىدە تەكشۈرۈش لايىھىسى تەس

مۇناسىۋەتلىك مەھسۇلاتلار: