بىۋاسىتە RT-qPCR Kit
چۈشەندۈرۈش
بىۋاسىتە RT-qPCR يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرى ئايرىم ئورالغان RT-qPCR بۇففېر ۋە يۇقىرى ئۈنۈملۈك ئېنزىم بىلەن تەمىنلەيدۇئارىلاشما (Taq 、 M-MLV 、 RI) back ئارقا يۈرۈشلۈك زاپچاس ۋە سىستېما قۇرۇشقا قۇلايلىق يارىتىدۇتەڭشەش simple ئاددىي دەلىللەش ئىچىدە.
ئۆلچىمى
500T, 50,000T
يۈرۈشلۈك زاپچاسلار
يۈرۈشلۈك مەزمۇنلار (20 μL رېئاكسىيە سىستېمىسى) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 T. | 50 مىڭ T. | |
بىۋاسىتە ئېنزىم ئارىلاشمىسى | 500 μL× 1 | 50 mL× 1 |
2 × بىۋاسىتە RT-qPCR بۇففېر | 1 mL× 5 | 500 mL× 1 |
كۆرسەتمە | 1 | 1 |
مەشغۇلات باسقۇچلىرى
قايتا تەييارلاشتىن بۇرۇن ، زاپچاستىكى بارلىق رېئاكتورلارنى ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ئېرىتىپ يۇمشاق سوقۇش كېرەك.
A: تەييارلىق قىلىڭ of قېلىپ ۋە reagent
1. تەييارلانغان RNA ئەندىزىسىنى تەييارلاڭ (Foregene Total RNA Isolation Kit يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرىنى RNA قېلىپىنى قېزىش ۋە تازىلاش تەۋسىيە قىلىنىدۇ) ياكى ئەۋرىشكە پارچىلاش مەھسۇلاتى (Foregene Lysis سىستېمىسىنى ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ) ، ئالاھىدە پىرىس (10 μM) ۋە باشقا مۇناسىۋەتلىك ئىستېمال بۇيۇملىرى ، سايمانلىرى.
2. 2 × بىۋاسىتە RT-qPCR بۇففېر ، RNase-Free ddH2O ۋە 20 × ROX پايدىلىنىش بوياق قويۇڭ.'s لازىم) مۇز بىلەن ساندۇقتا ، بۇلارنى تەبىئىي ئېرىتىپ ئاستا-ئاستا ئارىلاشتۇرۇڭ.
B: تەييارلىق قىلىڭ of RT-qPCR سىستېما
جەدۋەل 1 : تەييارلىق قىلىڭ of RT-qPCR system
زاپچاس | توم | ئاخىرقى مەركەزلىشىش |
2 × بىۋاسىتە RT-qPCR بۇففېر | 10 μL | 1 × |
بىۋاسىتە ئېنزىم ئارىلاشمىسى | 1μL | |
Forward Primer (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
تەتۈر پىرىمېر (10 mMM) | 0.8 μL | 50-900nM |
Probe (4 μM) | 1μL | 200nM |
قېلىپ (RNA ياكى Lysate) | X μL | |
20 × ROX پايدىلىنىش بوياق | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
ئومۇمىي ھەجىمى | 20μL |
C: تەڭشەك the RT-qPCR ئىنكاس پروگرامما
جەدۋەل 2 : RT-qPCR reaction پروگرامما تەڭشەش (for مەسىلەن: ئىككى-step method)
قەدەم | تېمپېراتۇرا | ۋاقىت | ۋېلىسىپىت | مەزمۇن | |
1 | 50 ℃ | 15 مىنۇت | 1* | 1 | تەتۈر كۆچۈرۈلۈش |
2 | 95 ℃ | 1 مىنۇت | 1 | ئالدىن كېلىشىش | |
3 | 95 ℃ | 10 سېكۇنت | 40-45 | Denaturation | |
60 ℃ | 30 سېكۇنت 2 * | Anneal / Extension |
ساقلاش ۋە ساقلاش ئۆمرى
-بۇ زاپچاسنى -20 دە ساقلاش كېرەك± 5℃.كۈچكە ئىگە مۇددىتى 12 ئاي.
-قايتا-قايتا مۇزلاش دەۋرىدىن ساقلىنىڭ (<5 دەۋرىيلىك).