ھۈجەيرە بىۋاسىتە RT qPCR يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرى - SYBR GREEN مەن بىۋاسىتە ھۈجەيرە لىز ھۈجەيرىسى تەييار بىر باسقۇچلۇق qRT-PCR زاپچاسلىرى
چۈشەندۈرۈش
بۇ يۈرۈشلۈك ئۈسكۈنىگە ئۆزگىچە لىز بۇففېر سىستېمىسى ئىشلىتىلگەن بولۇپ ، RT-qPCR ئىنكاسى ئۈچۈن مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرە ئەۋرىشكىسىدىن RNA نى تېزلىكتە قويۇپ بېرەلەيدۇ ، بۇ ئارقىلىق ۋاقىت ئىسراپچىلىقى ۋە جاپالىق RNA تازىلاش جەريانىنى يوقىتىدۇ.RNA قېلىپىنى پەقەت 7 مىنۇتتىلا ئېرىشكىلى بولىدۇ.5×Direct RT Mix and 2×يۈرۈشلۈك زاپچاس تەمىنلىگەن بىۋاسىتە qPCR Mix-SYBR رېئاكتورى تېز ۋە ئۈنۈملۈك ھالدا ھەقىقىي PCR نەتىجىسىگە ئېرىشەلەيدۇ.
5×Direct RT Mix and 2×بىۋاسىتە qPCR Mix-SYBR كۈچلۈك چەكلىگۈچكە بەرداشلىق بېرىش ئىقتىدارىغا ئىگە ، ئەۋرىشكىنىڭ لىماتسىنى بىۋاسىتە RT-qPCR نىڭ قېلىپى قىلىپ ئىشلىتىشكە بولىدۇ.بۇ يۈرۈشلۈك زاپچاستا ئۆزگىچە RNA يۇقىرى قويۇقلۇقتىكى Foregene تەتۈر كۆچۈرۈلگەن نۇسخىسى ۋە Hot D-Taq DNA پولىمېراسى ، DNTPs ، MgCl بار.2، ئىنكاس قايتۇرغۇچ ، PCR ئەلالاشتۇرغۇچ ۋە تۇراقلاشتۇرغۇچ.
ئۆلچىمى
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
يۈرۈشلۈك زاپچاسلار
| I قىسىم | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| ئىككىنچى قىسىم | DNA Eraser |
| 5 × Direct RT Mix | |
| 2 × بىۋاسىتە qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX پايدىلىنىش بوياق | |
| RNase-free ddH2O | |
| كۆرسەتمە | |
ئالاھىدىلىكى ۋە ئەۋزەللىكى
■ئاددىي ۋە ئۈنۈملۈك: Cell Direct RT تېخنىكىسى بىلەن RNA ئەۋرىشكىسىنى 7 مىنۇتتىلا ئېرىشكىلى بولىدۇ.
Ample ئەۋرىشكە تەلىپى كىچىك ، 10 ھۈجەيرە تەكشۈرگىلى بولىدۇ.
■ يۇقىرى ئېقىمى: 384 ، 96 ، 24 ، 12 ، 6 قۇدۇق تاختىسىدا يېتىشتۈرۈلگەن ھۈجەيرىلەردە RNA نى تېزلا بايقىيالايدۇ.
■ DNA ئۆچۈرگۈچى قويۇپ بېرىلگەن گېننى تېزلىكتە چىقىرىپ تاشلاپ ، كېيىنكى تەجرىبە نەتىجىسىگە بولغان تەسىرىنى زور دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ.
■ ئەلالاشتۇرۇلغان RT ۋە qPCR سىستېمىسى ئىككى باسقۇچلۇق RT-PCR تەتۈر ترانسكرىپسىيەسىنى تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ۋە PCR نى تېخىمۇ كونكرېتلاشتۇرىدۇ ، ھەمدە RT-qPCR ئىنكاس چەكلىگۈچكە تېخىمۇ چىداملىق.
Kit application
قوللىنىش دائىرىسى: مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرىلەر.
- ئەۋرىشكە لايزىسى ئارقىلىق تارقىتىلغان RNA: پەقەت بۇ يۈرۈشلۈكنىڭ RT-qPCR قېلىپىغىلا ماس كېلىدۇ.
- بۇ زاپچاسنى تۆۋەندىكى مەقسەتلەردە ئىشلىتىشكە بولىدۇ: گېن ئىپادىلەش ئانالىزى ، siRNA ۋاسىتىلىك گېننىڭ سۈكۈت قىلىش ئۈنۈمىنى دەلىللەش ، دورا تەكشۈرۈش قاتارلىقلار.
دىئاگرامما
ساقلاش ۋە ساقلاش ئۆمرى
بۇ زاپچاسنىڭ I قىسمى 4 at دا ساقلىنىشى كېرەك.ئىككىنچى قىسىم -20 at دە ساقلىنىشى كېرەك.
Foregene Protease Plus II نى 4 دە ساقلاش كېرەك℃ ، -20 at دە توڭلىماڭ.
Reagent 2×بىۋاسىتە qPCR Mix-SYBR -20 دە ساقلىنىشى كېرەك℃قاراڭغۇلۇقتائەگەر دائىم ئىشلىتىلسە ، 4 دە ساقلىغىلى بولىدۇShort قىسقا مۇددەتلىك ساقلاش ئۈچۈن (10 كۈن ئىچىدە ئىشلىتىش).
ھەقىقىي ۋاقىت PCR دەسلەپكى لايىھىلەش پرىنسىپى
ئالغا ئىلگىرىلەش ۋە تەتۈر يۆنىلىشلىك كۆرسەتكۈچ
Real Time PCR ئۈچۈن دەسلەپكى لايىھىلەش ئىنتايىن مۇھىم.باشلانغۇچلار PCR كېڭەيتىشنىڭ كونكرېتلىقى ۋە ئۈنۈمى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، تۆۋەندىكى پرىنسىپلارغا ئاساسەن لايىھىلىگىلى بولىدۇ:
دەسلەپكى ئۇزۇنلۇقى: 18-30bp.
GC مەزمۇنى:% 40-60.
Tm قىممىتى: Primer 5 غا ئوخشاش دەسلەپكى لايىھىلەش يۇمشاق دېتالى دەسلەپكى كۆرسەتكۈچنىڭ Tm قىممىتىنى بېرەلەيدۇ.يۇقىرى ئېقىن ۋە تۆۋەن ئېقىندىكى Tm قىممىتى ئىمكانقەدەر يېقىن بولۇشى كېرەك.Tm ھېسابلاش فورمۇلاسىنى ئىشلىتىشكە بولىدۇ: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR ئىجرا قىلغاندا ، تېمپېراتۇرا ° C5 تىن تۆۋەن تېمپېراتۇرا ئادەتتە تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى قىلىپ تاللىنىدۇ (تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسىنىڭ ماس ھالدا ئۆسۈشى PCR ئىنكاسىنىڭ خاسلىقىنى ئاشۇرالايدۇ).
Primers and PCR products:
لايىھىلەش دەسلەپكى PCR كېڭەيتىش مەھسۇلاتنىڭ ئۇزۇنلۇقى ئەڭ ياخشىسى 100-150bp.
قېلىپنىڭ ئىككىلەمچى قۇرۇلما رايونىدىكى لايىھىلەش باشلانغۇچلىرىنى ئىمكانقەدەر ساقلىنىش كېرەك.
يۇقىرى ئېقىن ۋە تۆۋەنكى ئېقىندىكى 3 ′ ئۇچى ئارىسىدا 2 ياكى ئۇنىڭدىن ئارتۇق تولۇقلاش ئاساسى شەكىللىنىشتىن ساقلىنىڭ.
Primer 3 ′ تېرمىنال ئاساسى ئۇدا 3 G ياكى C بىلەن بىللە بولمايدۇ.
پىرىمېرلارنىڭ ئۆزىدە قوشۇمچە قۇرۇلما بولالمايدۇ ، بولمىسا چاچ ياساش قۇرۇلمىسى شەكىللىنىپ ، PCR نىڭ كۈچىيىشىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.
دەسلەپكى تەرتىپتە ATCG نى ئىمكانقەدەر تەكشى تەقسىملەش ، 3 ′ تېرمىنال بازىسىدىن T دىن ساقلىنىش كېرەك.
قوشۇمچە 1 ： كاتەكچە بىۋاسىتە RT-qPCR يۈرۈشلۈك زاپچاس زاپچاسلىرى
1.Cell Lysis Solution
|
| |||
| يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (24 قۇدۇق لىز سىستېمىسى / قۇدۇق) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T. | 500 T. | ||
| Partمەن | Buffer CL | 20 مىللىلېتىر | 100 مىللىمېتىر |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 مىللىلېتىر | |
| PartII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (20 μl رېئاكسىيە سىستېمىسى) | DRT-01011-B1 |
| 200 T. | |
| 5 × Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (20 μl رېئاكسىيە سىستېمىسى) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T. | 1000 T. | |
| 2 × بىۋاسىتە qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50 × ROX پايدىلىنىش بوياق | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 مىللىمېتىر | 10 مىللىلېتىر |
كۆرسەتمە قوللانمىسى:
