(96-قۇدۇق) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR يېشىل I.
چۈشەندۈرۈش
The(96-قۇدۇق) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit-SYBR Green I.تەمىنلەيدۇئۆزگىچە لىز بۇففېر سىستېمىسىto RNA نى تېز قويۇپ بېرىدۇمەدەنىيەتلىك كاتەكچىدىنRT-qPCR ئىنكاسىنىڭ ئەۋرىشكىسى ، ۋاقىت ئىسراپچىلىقى ۋە جاپالىقRNA تازىلاش جەريانى ، تەلەپ قىلىنغان RNA قېلىپىنى ئېلىش ئۈچۈن پەقەت 7 مىنۇت ۋاقىت كېتىدۇ.The5 × Direct RT Mixۋە2 × بىۋاسىتە qPCR Mix-SYBRساندۇقتا تەمىنلەنگەن تېز ۋەھەقىقىي مىقدارنى ئۈنۈملۈك قولغا كەلتۈرۈشPCR نەتىجىسى.
5 × Direct RT Mix ۋە 2 × Direct qPCR Mix-SYBR كۈچلۈك چەكلىگۈچكە بەرداشلىق بېرىش ئىقتىدارىغا ئىگە بولۇپ ، ئەۋرىشكىنىڭ لىزاتىنى ئىشلىتىپ ئۈنۈملۈك تەتۈر كۆچۈرۈش ۋە كونكرېت كۈچەيتىشنىڭ قېلىپىنى سىناق قىلالايدۇ.رېئاكتوردا RNA غا بولغان يېقىنلىقى بار Foregene ئۆزگىچە تەتۈر ترانسكرىپسىيەسى ، شۇنداقلا Hot D- Taq DNA پولىمېراسى ، DNTPs ، MgCl قاتارلىقلار بار.2 ، رېئاكسىيە بۇففېر ، PCR ئەلالاشتۇرغۇچ ۋە تۇراقلاشتۇرغۇچ بولۇپ ، لىز بۇففېر بىلەن بىرلىشىپ ئەۋرىشكەنى تېز ، ئاسان ۋە توغرا بايقىغىلى بولىدۇ ، ئۇ يۇقىرى سەزگۈرلۈك ، كۈچلۈك ئالاھىدىلىك ۋە مۇقىملىق ئالاھىدىلىكىگە ئىگە.
بۇ يۈرۈشلۈك 96 خىل مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرىلەرنىڭ مىكرو سىستېما لىمزىسىنى نىشان قىلغان بولۇپ ، بىردەكلىكى ۋە ئىزچىللىقى ياخشى.بۇ زاپچاس زاپچاسلىرى 96 لىز رېئاكسىيەسى ، 96 تەتۈر كۆچۈرۈلۈش رېئاكسىيەسى ۋە 96 × 2 qPCR ئىنكاسى بىلەن تەمىنلەيدۇ ، بۇ 96 قۇدۇق ھۈجەيرىسىنىڭ تاختىسىنى بىر قېتىم ئىشلىتىشكە بولىدۇ ، قايتا-قايتا ئېچىلىش ، توڭلىتىش ۋە ئېرىتىش ۋە رېئاكتورنىڭ ئىقتىدارىنىڭ ناچارلىشىشىدىن كېلىپ چىققان بۇلغىنىشنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.
يۈرۈشلۈك زاپچاسلار
يۈرۈشلۈك تەركىبلەر ( 50 μL lysis system / 20 μLRT reaction system / 20μL qPCR ئىنكاس سىستېمىسى) | DRT-03011 | ئەسكەرتىش | |
96T | |||
PartI | BufferCL | 5 mL | CellLysis |
ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
BufferST | 500 μL | ||
Part II | DNAEraser | 100 μL | |
5 × Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
2 × بىۋاسىتە qPCR ئارىلاش-SYBR | 1 مL × 2 | qPCR | |
50 × ROX پايدىلىنىش بوياق | 400µL | ||
RNase- ھەقسىزddH2 O | 1.7mL |
| |
Manual | 1 پارچە | 1 مۇلازىمەت |
*: لىز رېئاكتىپلىق DNA ئۆچۈرگۈچ زاپچاسنىڭ ئىككىنچى قىسمىغا كىرگۈزۈلگەنCell Lysis ، RT ۋە qPCR زاپچاسلىرىنى ئايرىم سېتىۋالغىلى بولىدۇ.
ئالاھىدىلىكى ۋە ئەۋزەللىكى
■ئاددىي ۋە ئۈنۈملۈك: Cell Direct RT تېخنىكىسى بىلەن RNA ئەۋرىشكىسىنى 7 مىنۇتتىلا ئېرىشكىلى بولىدۇ.
Ample ئەۋرىشكە تەلىپى كىچىك ، 10 ھۈجەيرە تەكشۈرگىلى بولىدۇ.
■ يۇقىرى ئېقىمى: 384 ، 96 ، 24 ، 12 ، 6 قۇدۇق تاختىسىدا يېتىشتۈرۈلگەن ھۈجەيرىلەردە RNA نى تېزلا بايقىيالايدۇ.
■ DNA ئۆچۈرگۈچى قويۇپ بېرىلگەن گېننى تېزلىكتە چىقىرىپ تاشلاپ ، كېيىنكى تەجرىبە نەتىجىسىگە بولغان تەسىرىنى زور دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ.
■ ئەلالاشتۇرۇلغان RT ۋە qPCR سىستېمىسى ئىككى باسقۇچلۇق RT-PCR تەتۈر ترانسكرىپسىيەسىنى تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ۋە PCR نى تېخىمۇ كونكرېتلاشتۇرىدۇ ، ھەمدە RT-qPCR ئىنكاس چەكلىگۈچكە تېخىمۇ چىداملىق.
Kit application
قوللىنىش دائىرىسى: مەدەنىيەتلىك ھۈجەيرىلەر.
- ئەۋرىشكە لايزىسى ئارقىلىق تارقىتىلغان RNA: پەقەت بۇ يۈرۈشلۈكنىڭ RT-qPCR قېلىپىغىلا ماس كېلىدۇ.
- بۇ زاپچاسنى تۆۋەندىكى مەقسەتلەردە ئىشلىتىشكە بولىدۇ: گېن ئىپادىلەش ئانالىزى ، siRNA ۋاسىتىلىك گېننىڭ سۈكۈت قىلىش ئۈنۈمىنى دەلىللەش ، دورا تەكشۈرۈش قاتارلىقلار.
ساقلاش ۋە ساقلاش ئۆمرى
بۇ زاپچاسنىڭ I قىسمى 4 دە ساقلىنىشى كېرەك℃;ئىككىنچى قىسىم -20 at دە ساقلىنىشى كېرەك.
Foregene Protease Plus II نى 4 دە ساقلاش كېرەك℃ ، -20 at دە توڭلىماڭ.
Reagent 2×بىۋاسىتە qPCR Mix-Taqman -20 دە ساقلىنىشى كېرەك℃قاراڭغۇلۇقتائەگەر دائىم ئىشلىتىلسە ، 4 دە ساقلىغىلى بولىدۇShort قىسقا مۇددەتلىك ساقلاش ئۈچۈن (10 كۈن ئىچىدە ئىشلىتىش).
ھەقىقىي ۋاقىت PCR دەسلەپكى لايىھىلەش پرىنسىپى
ئالغا ئىلگىرىلەش ۋە تەتۈر يۆنىلىشلىك كۆرسەتكۈچ
Real Time PCR ئۈچۈن دەسلەپكى لايىھىلەش ئىنتايىن مۇھىم.باشلانغۇچلار PCR كېڭەيتىشنىڭ كونكرېتلىقى ۋە ئۈنۈمى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ ، تۆۋەندىكى پرىنسىپلارغا ئاساسەن لايىھىلىگىلى بولىدۇ:
- دەسلەپكى ئۇزۇنلۇقى: 18-30bp.
- GC مەزمۇنى:% 40-60.
- Tm قىممىتى: Primer 5 غا ئوخشاش دەسلەپكى لايىھىلەش يۇمشاق دېتالى دەسلەپكى كۆرسەتكۈچنىڭ Tm قىممىتىنى بېرەلەيدۇ.يۇقىرى ئېقىن ۋە تۆۋەن ئېقىندىكى Tm قىممىتى ئىمكانقەدەر يېقىن بولۇشى كېرەك.Tm ھېسابلاش فورمۇلاسىنى ئىشلىتىشكە بولىدۇ: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR ئىجرا قىلغاندا ، تېمپېراتۇرا ° C5 تىن تۆۋەن تېمپېراتۇرا ئادەتتە تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى قىلىپ تاللىنىدۇ (تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسىنىڭ ماس ھالدا ئۆسۈشى PCR ئىنكاسىنىڭ خاسلىقىنى ئاشۇرالايدۇ).
- Primers and PCR products:
- لايىھىلەش دەسلەپكى PCR كېڭەيتىش مەھسۇلاتنىڭ ئۇزۇنلۇقى ئەڭ ياخشىسى 100-150bp.
- قېلىپنىڭ ئىككىلەمچى قۇرۇلما رايونىدىكى لايىھىلەش باشلانغۇچلىرىنى ئىمكانقەدەر ساقلىنىش كېرەك.
- يۇقىرى ئېقىن ۋە تۆۋەنكى ئېقىندىكى 3 ′ ئۇچى ئارىسىدا 2 ياكى ئۇنىڭدىن ئارتۇق تولۇقلاش ئاساسى شەكىللىنىشتىن ساقلىنىڭ.
- Primer 3 ′ تېرمىنال ئاساسى ئۇدا 3 G ياكى C بىلەن بىللە بولمايدۇ.
- پىرىمېرلارنىڭ ئۆزىدە قوشۇمچە قۇرۇلما بولالمايدۇ ، بولمىسا چاچ ياساش قۇرۇلمىسى شەكىللىنىپ ، PCR نىڭ كۈچىيىشىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ.
- دەسلەپكى تەرتىپتە ATCG نى ئىمكانقەدەر تەكشى تەقسىملەش ، 3 ′ تېرمىنال بازىسىدىن T دىن ساقلىنىش كېرەك.
قوشۇمچە1 : C.ell DirectRT-qPCR Kit component تولۇقلىما بولىقى
1. Cell Lysis Solution
Cell Lysis Solution | |||
يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (24 قۇدۇق لىز سىستېمىسى / قۇدۇق) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T. | 500 T. | ||
Partمەن | Buffer CL | 20 مىللىلېتىر | 100 مىللىمېتىر |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 مىللىلېتىر | |
PartII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
RT Mix | |
يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (20 μl رېئاكسىيە سىستېمىسى) | DRT-01011-B1 |
200 T. | |
5 × Direct RT Mix | 800 μl |
RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
qPCR Mix | ||
يۈرۈشلۈك زاپچاسلار (20 μl رېئاكسىيە سىستېمىسى) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
200 T. | 1000 T. | |
2 × بىۋاسىتە qPCR ئارىلاش-تاقمان | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
20 × ROX پايدىلىنىش بوياق | 40 μl | 200 μl |
RNase-Free ddH2O | 1.7 مىللىمېتىر | 10 مىللىلېتىر |
كۆرسەتمە قوللانمىسى: