Escherichia coli O157: H7 يادرو كىسلاتاسىنى بايقاش زاپچىسى (PCR فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئۇسۇلى)
يۈرۈشلۈك چۈشەندۈرۈش:
Cat.No.FP102
ئۇ E. coli O157: H7 نى يېمەكلىك ، يەم-خەشەك ، سۇ ئەۋرىشكىسى ۋە مۇھىت ئەۋرىشكىسىدە تېز بايقاش ۋە تەكشۈرۈشكە ئىشلىتىلىدۇ.
چۈشەندۈرۈش
ئۇ E. coli O157: H7 نى يېمەكلىك ، يەم-خەشەك ، سۇ ئەۋرىشكىسى ۋە مۇھىت ئەۋرىشكىسىدە تېز بايقاش ۋە تەكشۈرۈشكە ئىشلىتىلىدۇ.
[سىناق پرىنسىپى]فلۇئورېسسېنسىيەلىك PCR تېخنىكىسىنىڭ پرىنسىپىغا ئاساسەن ، ئالاھىدە پرېرمېرلار ۋە تاقمان تەكشۈرۈش ئەسۋابى Escherichia coli O157: H7 نىڭ ئالاھىدە گېنى ئۈچۈن لايىھەلەنگەن بولۇپ ، فلۇئورېسسېنسىيەلىك PCR ئەسۋابى ئارقىلىق بايقالغان ، شۇڭا Escherichia coli O157: H7 نىڭ DNA سىنىڭ بايقىلىشىنى ئەمەلگە ئاشۇرغان.
يۈرۈشلۈك مەزمۇنلار
ئەسكەرتىش: ROX قانىلى تەكشۈرۈشنى ئۆز ئىچىگە ئالمايدۇ.
| Component | Specification | Quantity |
| Buffer A. | Tube | 1 |
| Buffer B. | Tube | 1 |
| ئاكتىپ كونترول | Tube | 1 |
| سەلبىي كونترول | Tube | 1 |
مۆلچەرلەنگەن ئىشلىتىش
ئۇ ئىشلىتىلىدۇ E. coli O157 نى تېز بايقاش ۋە تەكشۈرۈش: يېمەكلىك ، يەم-خەشەك ، سۇ ئەۋرىشكىسى ۋە مۇھىت ئەۋرىشكىسىدىكى H7.
ساقلاش شەرتلىرى ۋە مۇددىتى توشقان ۋاقىت
-20 at قاراڭغۇدا ساقلاڭ ، قايتا-قايتا مۇزلاش ۋە ئېرىتىشتىن ساقلىنىڭ.
كۈچكە ئىگە مۇددىتى 12ئايلار ، ئىشلەپچىقىرىش ۋاقتى سىرتقى ئورالمىدا كۆرسىتىلىدۇ.
ئەسۋابلار ۋە ئىستېمال بۇيۇملىرى
فلۇئورېسسېنسىيىلىك مىقدارلاشقان PCR ئەسۋابى ، تۇرۇبا مىلتىقى ۋە ماسلاشتۇرۇش ئۇسۇللىرى ، قاينام-تاشقىنلىق تەۋرىنىش ، كىچىك مەركەزدىن قېچىش.
ئىشلىتىش
1. ئۈلگە بىر تەرەپ قىلىش
1.1 ئەۋرىشكە تىپى: بۇ يۈرۈشلۈك يېمەكلىك Escherichia coli O157: H7 تەرىپىدىن بۇلغانغان دەپ گۇمان قىلىنغان يېمەكلىك ، يەم-خەشەك ، سۇ ئەۋرىشكىسى ۋە باشقا ئەۋرىشكەلەرگە ماس كېلىدۇ.چوڭقۇر پىششىقلاپ ئىشلەنگەن گۆش مەھسۇلاتلىرى ، ئىچىملىكلەر ۋە تەركىبىدە پېگمېنت بار باشقا ماددىلار ئۈچۈن ، چايقاش كېرەك ، فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالىنىڭ توپلىنىشىغا تەسىر يەتكۈزۈشتىن ساقلىنىش كېرەك.
1.2 ئەۋرىشكە بىر تەرەپ قىلىش: ئەۋرىشكە تەييارلاش ، بېيىتىش مەدەنىيىتى ۋە Escherichia coli O157: H7 نىڭ يېمەكلىك بىخەتەرلىكى دۆلەتلىك ئۆلچەملىك يېمەكلىك مىكروبولوگىيەلىك تەكشۈرۈشى.
- Nسۈيدۈك كىسلاتاسى ئېلىش
1.5 مىللىمېتىرلىق مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىگە 20 مىللىلىتىر موللاش ئېرىتمىسىنى ئېلىڭ ، 200 مىللىمېتىرلىق مىكروب لىزات (قوشۇمچە زاپچاس لازىم) ، قاينام 30 سېكۇنت ، قىسقا ۋاقىت ئىچىدە مەركەزدىن قاچۇرۇپ بىر چەتكە قايتۇرۇڭ.
ئەسكەرتىش: لىماتتىن يادرو كىسلاتاسىنى ئېلىشنى 10 مىنۇت ئىچىدە تاماملاش كېرەك ، ئۇزاق ساقلىغىلى بولمايدۇ.
3. يادرو كىسلاتاسىنى كۈچەيتىش
3.1 ئىشلىتىش ئۈچۈن فلۇئورېسسېنسىيىلىك مىقدار PCR ئەسۋابىنى ئېچىڭ.
بۇففېر A ۋە بۇففېر B يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرىدىن ئوبدان ئېرىتىپ ، قىسقا ۋاقىت ئىچىدە مەركەزدىن قاچۇرۇش.ھەر PCR رېئاكسىيە تۇرۇبىسىغا 18 μL Buffer A ۋە 2 μL Buffer B نى قوشۇڭ.ئاندىن PCR رېئاكسىيە نەيچىسىگە پاسسىپ كونترول قىلىش ، ئېلىنغان يادرو كىسلاتاسى ۋە ئاكتىپ كونترولنىڭ ھەر بىرىگە 5 mL قوشۇڭ ، تۇرۇبىنى قاپلاڭ ۋە مەركەزدىن قاچۇرۇڭ.
3.3.
| قەدەم | پروگرامما | دەۋرىيلىك سانى |
| 1 | 37 ℃ 5min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95 ° C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30s (فلۇئورېسسېنسىيە توپلاڭ) |
مەسىلىلەرنى تەھلىل قىلىشقا يېتەكچىلىك قىلىدۇ
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
ھېچقانداق RNA چىقارغىلى بولمايدۇ ياكى يادرو كىسلاتاسىنىڭ مەھسۇلات مىقدارى تۆۋەن بولىدۇ
ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈنۈمىگە تەسىر كۆرسىتىدىغان نۇرغۇن ئامىللار بار ، مەسىلەن: ئەۋرىشكە RNA مەزمۇنى ، مەشغۇلات ئۇسۇلى ، يوقىتىش مىقدارى قاتارلىقلار.
كۆپ ئۇچرايدىغان سەۋەبلەرنى تەھلىل قىلىش ：
1. مەشغۇلات جەريانىدا مۇنچا ياكى تۆۋەن تېمپېراتۇرا (4 سېلسىيە گرادۇس) مەركەزدىن قاچۇرۇش.
تەكلىپ: ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسى (15-25 سېلسىيە گرادۇس) مەشغۇلات ، ھەرگىز مۇز مۇنچىسى ۋە تۆۋەن تېمپېراتۇرا مەركەزدىن قاچۇرۇش.
2. ئەۋرىشكە ساقلاش ياكى ئەۋرىشكە ساقلاش ۋاقتى بەك ئۇزۇن.
تەكلىپ: ئەۋرىشكىلەرنى -80 سېلسىيە گرادۇستا ساقلاڭ ياكى سۇيۇق ئازوتتا توڭلىتىڭ ، قايتا-قايتا توڭلىتىشتىن ساقلىنىڭ.RNA ئېلىش ئۈچۈن يېڭى توپلانغان ئەۋرىشكىلەرنى ئىشلىتىپ بېقىڭ.
3. ئەۋرىشكە لايزىسى يېتەرلىك ئەمەس
تەۋسىيە: ئەۋرىشكە بىلەن خىزمەت ئېرىتمىسىنىڭ (سىزىقلىق ئاكرىلامىد) تولۇق ئارىلاشتۇرۇلۇپ ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا (15-25 سېلسىيە گرادۇس) 10 مىنۇت سىڭدۈرۈلگەنلىكىگە كاپالەتلىك قىلىڭ.
4. ئۈندىدار خاتا قوشۇلدى
تەۋسىيە: تازىلاش تۈۋرۈكىنىڭ پەردىسىنىڭ ئوتتۇرىسىغا RNase-Free ddH2O نىڭ قوشۇلغانلىقىغا كاپالەتلىك قىلىڭ
5. Buffer viRW2 دىكى سۇسىز ئېتانولنىڭ مىقدارى مۇۋاپىق ئەمەس
تەكلىپ: كۆرسەتمىگە ئەمەل قىلىڭ ، بۇففېر viRW2 غا توغرا مىقداردىكى سۇسىز ئېتانولنى قوشۇڭ ھەمدە زاپچاسنى ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ。
6. مۇۋاپىق ئەۋرىشكە ئىشلىتىش.
تەكلىپ: باففېر viRL نىڭ 500μl ئەۋرىشكىسىدىن 200µl ئەۋرىشكە.ئەۋرىشكە مىقدارىنىڭ ھەددىدىن زىيادە ئېشىپ كېتىشى RNA ئېلىش نىسبىتىنى تۆۋەنلىتىدۇ.
7. مۇۋاپىق بولمىغان سۈزۈش مىقدارى ياكى تولۇق تولۇقلاش.
تەكلىپ: ساپلاشتۇرۇش تۈۋرۈكىنىڭ سۈزۈك ھەجىمى 30-50μl;ئەگەر يوقىتىش ئۈنۈمى قانائەتلىنەرلىك بولمىسا ، ئالدىن قىزىتىلغان RNase-Free ddH نى قوشۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ2O ۋە ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسىغا قويۇش ۋاقتىنى ئۇزارتىڭ ، مەسىلەن 5-10 مىنۇت
8. ساپلاشتۇرۇش تۈۋرۈكى Buffer viRW2 دا چايقالغاندىن كېيىن ئېتانول قالدۇقى بار.
تەكلىپ: ئەگەر ئېتانول Buffer viRW2 دا يۇيۇلغاندىن كېيىن ۋە قۇرۇق تۇرۇبا مەركىزىدىن 2 مىنۇت تۇرغۇزۇلسا ، تازىلاش تۈۋرۈكىنى قۇرۇق نەيچە مەركەزدىن قاچۇرغاندىن كېيىن ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 5 مىنۇت قويۇپ قويۇپ ، قالغان ئېتاننى تولۇق چىقىرىۋەتكىلى بولىدۇ.
ساپلاشتۇرۇلغان RNA مولېكۇلاسىنىڭ بۇزۇلۇشى
ساپلاشتۇرۇلغان RNA نىڭ سۈپىتى ئەۋرىشكە ساقلاش ، RNase بۇلغىنىش ۋە مەشغۇلات قاتارلىق ئامىللار بىلەن مۇناسىۋەتلىك.
كۆپ ئۇچرايدىغان سەۋەبلەرنى تەھلىل قىلىش ：
1. توپلانغان ئەۋرىشكەلەر ۋاقتىدا ساقلانمىدى.
تەكلىپ: ئەۋرىشكە يىغىپ بولغاندىن كېيىن ۋاقتىدا ئىشلىتىلمىسە ، دەرھال -80 at ياكى سۇيۇق ئازوتتا ساقلاڭ.RNA مولېكۇلاسىنى ئېلىش ئۈچۈن ، ئىمكانقەدەر يېڭى توپلانغان ئەۋرىشكىلەرنى ئىشلىتىپ بېقىڭ.
2. يىغىۋېلىنغان ئەۋرىشكەلەر قايتا-قايتا مۇزلاپ توڭلاتتى.
تەكلىپ: ئەۋرىشكە يىغىش ۋە ساقلاش جەريانىدا قايتا-قايتا مۇزلاش ۋە ئېرىتىشتىن ساقلىنىڭ (بىر قېتىمدىن ئېشىپ كەتمەيدۇ) ، بولمىسا يادرو كىسلاتاسىنىڭ مەھسۇلات مىقدارى تۆۋەنلەيدۇ.
3.RNase مەشغۇلات ئۆيىدە تونۇشتۇرۇلدى ياكى بىر قېتىم ئىشلىتىلىدىغان پەلەي ، ماسكا قاتارلىقلار تاقىمىدى.
تەكلىپ: RNA مولېكۇلا تەجرىبىسىنى ئېلىش ئەڭ ياخشىسى ئايرىم RNA مەشغۇلات ئۆيىدە ئېلىپ بېرىلىدۇ ، تەجرىبە ئۈستىلى سىناقتىن بۇرۇن تازىلىنىدۇ.تەجرىبە جەريانىدا بىر قېتىم ئىشلىتىلىدىغان پەلەي ۋە ماسكا تاقاپ ، RNase نىڭ تونۇشتۇرۇشىدىن كېلىپ چىققان RNA نىڭ بۇزۇلۇشىدىن ساقلىنىڭ.
4. ئىشلىتىش جەريانىدا رېئاكتور RNase تەرىپىدىن بۇلغانغان.
تەكلىپ: مۇناسىۋەتلىك تەجرىبىلەر ئۈچۈن يېڭى ۋىرۇس RNA يېگانە زاپچاسلىرىنى ئالماشتۇرۇڭ.
5. مەركەزدىن ياسالغان تۇرۇبا ، تۇرۇبا ئۇچى قاتارلىقلارنىڭ RNase بۇلغىنىشى تەكلىپ: مەركەزدىن ياسالغان تۇرۇبا ، تۇرۇبا ئۇچى ۋە تۇرۇبا يولىنىڭ ھەممىسىنىڭ RNase يوق بولۇشىغا كاپالەتلىك قىلىڭ.
ساپلاشتۇرۇلغان RNA مولېكۇلاسى تۆۋەن ئېقىن تەجرىبىسىگە تەسىر كۆرسەتتى
ساپلاشتۇرۇش تۈۋرۈكى ئارقىلىق ساپلاشتۇرۇلغان RNA مولېكۇلاسى تۇز ئىئونى ياكى ئاقسىل بەك كۆپ بولسا تۆۋەن ئېقىندىكى سىناقلارغا تەسىر كۆرسىتىدۇ ، مەسىلەن: تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ، شىمالىي كۆك چىش قاتارلىقلار.
1. چىقىرىۋېتىلگەن RNA مولېكۇلاسىدا تۇز ئىئونلىرى قالدى.
تەۋسىيە: بۇففېر viRW2 غا توغرا مىقداردىكى سۇسىز ئېتانولنىڭ قوشۇلغانلىقىنى جەزملەشتۈرۈڭ ھەمدە مەشغۇلات كۆرسەتمىسىدىكى توغرا مەركەزدىن قاچۇرۇش سۈرئىتىگە ئاساسەن تازىلاش تۈۋرۈكىنى ئىككى قېتىم يۇيۇڭ ； ئەگەر تۇز ئىئونى قالغان بولسا ، بۇففېر viRW2 نى تازىلاش تۈۋرۈكىگە قوشسىڭىز بولىدۇ ، ھەمدە ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 5 مىنۇت قويۇپ قويسىڭىز بولىدۇ.ئاندىن مەركەزدىن قاچۇرۇپ ، تۇز ئىئونىنىڭ بۇلغىنىشىنى ئەڭ زور دەرىجىدە چىقىرىۋېتىڭ
2. تاللانغان RNA مولېكۇلاسىدا ئېتانول قالدى
تەكلىپ: تازىلاش تۈۋرۈكىنىڭ Buffer viRW2 تەرىپىدىن چايقىۋېتىلگەنلىكىنى جەزملەشتۈرگەندىن كېيىن ، مەشغۇلات كۆرسەتمىسىدىكى مەركەزدىن قاچۇرۇش سۈرئىتىگە ئاساسەن قۇرۇق تۇرۇبا مەركەزدىن قاچۇرۇش ئېلىپ بېرىڭ.ئەگەر يەنىلا ئېتانول قالغان بولسا ، قۇرۇق نەيچە مەركەزدىن قاچقاندىن كېيىن ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 5 مىنۇت قويۇپ قويۇپ ، قالغان ئېتاننى ئەڭ زور دەرىجىدە ئېلىۋەتكىلى بولىدۇ.
كۆرسەتمە قوللانمىسى:
ۋىرۇسلۇق RNA ئايرىۋېتىش قوللانمىسى قوللانمىسى
